EZH2靶向FAK/F-actin/ROS信号通路影响结直肠癌进展的机制研究

摘要

目的：探讨Zeste同源物增强子2(enhancer of Zeste homolog 2,EZH2)对黏着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）/丝状肌动蛋白（filamentous actin,F-actin）/活性氧（reactive oxygen species,ROS）通路的调节作用，分析其对结直肠癌（colorectal cancer,CRC）细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法：选取河北北方学院附属第一医院行CRC手术切除的患者50例，收集癌组织和癌旁正常组织标本，应用免疫组化法检测EZH2的表达水平，结合临床资料，分析EZH2的表达与临床病理参数及预后生存之间的关系；建立皮下移植瘤CRC裸鼠模型，分为阴性对照（EZH2 NC）组、EZH2过表达（EZH2 mimic）组、EZH2 NC+细胞松弛素D组和EZH2 mimic+细胞松弛素D组，培育14 d后观察肿瘤生长情况。体外培养人CRC细胞系SW480、SW620细胞，采用脂质体转染的方法，将SW480/SW620细胞分为4组：EZH2 NC组、EZH2 mimic组、EZH2 NC+细胞松弛素D组和EZH2mimic+细胞松弛素D组。通过Western blot实验检测各组细胞中FAK/F-actin/ROS通路相关蛋白的表达情况，应用免疫荧光染色观察F-actin表达和分布，采用划痕、Transwell、CCK-8实验检测细胞迁移、侵袭及细胞活力。ChIP-qPCR实验检测局部FAK、NADPH氧化酶2(NADPH oxidase 2,NOX2)、NADPH氧化酶4(NADPH oxidaes 4,NOX4)在EZH2上的富集情况。结果：免疫组化检测结果显示，患者CRC组织较癌旁正常组织高表达EZH2(P <0.05);EZH2的表达水平与肿瘤的淋巴结转移及远处转移事件密切相关（P均<0.05）；生存分析结果显示，低表达EZH2 CRC患者的5年总生存率显著高于EZH2高表达患者（P <0.05）。皮下移植瘤CRC裸鼠模型建立成功，EZH2 mimic组肿瘤体积明显大于EZH2 NC组（P <0.05），细胞松弛素D干预后，EZH2 NC+细胞松弛素D组和EZH2 mimic+细胞松弛素D组肿瘤体积分别较EZH2 NC组、EZH2 mimic组明显减小（P均<0.05），但两组间差异无统计学意义（P> 0.05）。EZH2 mimic组EZH2、p-FAK、p-Paxillin、NOX2、NOX4和c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）蛋白表达水平明显高于EZH2 NC组（P <0.05），而RUNX家族转录因子3(RUNX family transcription factor 3,RUNX3)蛋白表达水平稍低于EZH2 NC组（P <0.05），且F-actin分布数量、迁移能力和细胞活力增加（P <0.05）。EZH2、p-FAK和p-Paxillin蛋白表达水平较未干预组差异无统计学意义（P> 0.05）,NOX2、NOX4和p-JNK蛋白表达水平较未干预组则明显降低（P <0.05）,RUNX3蛋白表达水平较未干预组明显增加（P <0.05），而干预的两组间差异无统计学意义（P> 0.05）；此外，细胞松弛素D干预后F-actin分布数量、迁移能力和细胞活力均显著降低，而干预的两组间差异无统计学意义（P> 0.05）。ChIP-qPCR实验结果显示，使用EZH2抗体后，FAK、NOX2、NOX4所富集的启动子含量均显著升高（P <0.05）。结论：EZH2可通过上调FAK/F-actin/ROS通路活性进而促进CRC细胞的增殖、侵袭和转移。

关键词

EZH2 / FAK / F-actin / ROS / 结直肠癌 / 增殖 / 侵袭 / 迁移