RBM7在乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达及其对AKAP12表达的影响

摘要

目的：探讨RNA结合蛋白7(RNA binding motif protein 7,RBM7)在人源性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达，及其对A激酶锚定蛋白12(A-kinase anchoring protein 12,AKAP12)表达的影响。方法：在人源性乳腺癌细胞MDA-MB-231中分别转染RBM7过表达、干扰慢病毒（实验组）和相应对照慢病毒（对照组），经嘌呤霉素筛选后获得稳定转染的细胞株，使用荧光显微镜观察细胞转染情况。通过qRT-PCR和Western blot实验分别验证转染后细胞内RBM7的表达情况，并观察RBM7表达改变对AKAP12表达的影响。经RNA测序（RNA-sequence,RNA-seq）获得的差异表达基因进行基因本体论（gene ontology,GO）富集分析发现受RBM7影响的差异表达基因的主要富集通路，并结合UALCAN数据库分析AKAP12在乳腺癌中的表达情况。更进一步通过RNA结合蛋白免疫共沉淀（RNA binding protein immunoprecipitation,RIP）实验明确RBM7与AKAP12之间的关系。通过免疫组化在乳腺癌组织中明确RBM7表达与AKAP12表达之间的关系。结果：在乳腺癌细胞MDA-MB-231中分别转染RBM7过表达、干扰慢病毒，经嘌呤霉素筛选2周后，获得RBM7过表达及干扰的稳转细胞株。经RNA-seq获得的差异表达基因进行GO富集分析发现，受RBM7显著影响的基因主要富集在细胞周期通路，且UALCAN数据库分析发现AKAP12在乳腺癌中低表达（P<0.05）。qRT-PCR和Western blot显示，RBM7过表达能下调AKAP12的RNA及蛋白的表达（P<0.05）,RBM7干扰后能上调AKAP12的RNA及蛋白表达（P<0.05）。RIP实验显示，RBM7能直接结合AKAP12 mRNA从而发挥其对AKAP12的调节作用（P<0.05）。免疫组化结果表明，在人乳腺癌组织中RBM7表达与AKAP12表达呈显著负性关联（P<0.05）。结论：RBM7在乳腺癌细胞（MDA-MB-231）和乳腺癌组织中下调AKAP12的表达。

关键词

乳腺癌 / RNA结合蛋白7 / A激酶锚定蛋白12 / 细胞周期