膜联蛋白ANXA5调节黑色素瘤细胞铁死亡及其机制研究

摘要

目的：探究黑色素瘤中膜联蛋白A5(annexinA5,ANXA5)表达与铁死亡的相关性。方法：利用The Human Protein Atlas数据分析ANXA5在黑色素瘤中的表达情况，并采用人黑素瘤组织芯片进行免疫组化验证，再以黑色素瘤细胞B16F10为研究对象，通过CRISPR-Cas9技术构建ANXA5敲除株，通过CCK-8及乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）检测敲除ANXA5对B16F10铁死亡效应的影响，进一步通过RNA-seq寻找ANXA5调节铁死亡可能的靶分子并验证，最后在不同的黑色素瘤细胞中检测内源性ANXA5表达水平，并确认ANXA5对铁死亡敏感性的调节作用。结果：ANXA5在黑色素瘤组织中异常高表达，敲除或敲低ANXA5能促进黑色素瘤细胞对铁死亡的敏感性。酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acyl-CoA synthetase long-chain family member 4,ACSL4)作为铁死亡关键调节分子，与ANXA5表达呈负相关性，过表达ANXA5能降低ACSL4水平，表现出对铁死亡的抵抗性。结论：在黑色素瘤细胞中，敲低ANXA5能够上调ACSL4水平，增强黑色瘤细胞对铁死亡的敏感性，提示ANXA5有望成为黑色素瘤铁死亡治疗的潜在靶点。

关键词

黑色素瘤 / 铁死亡 / 膜联蛋白A5 / ASCL4