SELEX技术筛选乳腺癌亚型组织细胞的DNA适配子

潘先均; 刘美; 李光新; 徐发良

南京医科大学学报（自然科学版） ›› 2025, Vol. 45 ›› Issue (2) : 147 -156.

潘先均, 刘美, 李光新, 徐发良

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摘要

目的：获取结合于不同亚型乳腺癌组织细胞的DNA适配子。方法：采用PCR法建立随机双链DNA(double-stranded DNA,dsDNA)文库，用卵白素包被的琼脂糖珠从dsDNA库获取单链DNA(single-stranded DNA,ssDNA)文库；以消减细胞-指数富集的配体进化系统（systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX）技术为基础，将体外培养的乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231交替作为靶标进行正筛选，以相同组织来源的乳腺上皮细胞MCF-10A进行负筛选，琼脂糖电泳法检测PCR扩增和适配子回收、温度梯度实验优化PCR条件、流式细胞术监测适配子与靶细胞的亲和力，采用常规分子生物学技术完成适配子的克隆和测序，通过序列分析初步筛选适配子；综合采用流式细胞术、激光共聚焦和免疫荧光染色等实验优选DNA适配子。结果：成功建立ssDNA文库，优化了SELEX筛选条件，通过20轮交叉串联的细胞-SELEX筛选获取了特异性结合乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞的DNA适配子，随机挑选100个阳性克隆测序，鉴定出72个DNA适配子，采用Blastn程序进行精确比对未发现相似序列。通过序列分析初步筛选出适配子5个，经优选实验获取了可结合乳腺癌亚型组织细胞的适配子2个。结论：采用交叉串联的细胞-SELEX技术，可在较短时间获取结合不同临床乳腺癌亚型组织细胞的DNA适配子，为乳腺癌靶向递药系统的探索研究提供了可能。