循环miR-124作为铅神经毒性标志物的灵敏性、稳定性和组织特异性研究

摘要

目的：验证循环微小核糖核酸（microRNA,miRNA）-124的稳定性、组织特异性及其检测铅神经毒性的灵敏性，为循环miR-124用于铅神经毒性评价提供依据。方法：采用Zea-Longa线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型，采集血液样本离心、分装后立即检测或在室温、2～8℃和-70～-90℃条件下储存不同时间后，采用实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative realtime polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测miR-124的表达；分别使用对乙酰氨基酚（1 250 mg/kg）、异丙肾上腺素（2.5 mg/kg）和庆大霉素（80 mg/kg）建立大鼠肝毒性、心脏毒性和肾毒性模型，采集血液样本检测并比较造模前后循环miR-124的变化；使用醋酸铅（300、600 mg/kg）建立大鼠神经毒性模型，采用酶联免疫吸附测定方法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测白细胞介素（interleukin,IL）-10、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)的变化，比较检测到细胞因子和循环miR-124含量变化的时间评估其灵敏性。结果：以新鲜血液样本作为对照，血液样本室温保存6 h,2～8℃保存24 h,-70～-90℃保存36 d以及3次冻融后循环miR-124仍保持稳定，稳定性可以支持实验室需求；循环miR-124在大鼠肝毒性、心脏毒性和肾毒性模型中均无明显改变，具有良好的组织特异性；与细胞因子相比，循环miR-124可以更灵敏地检测铅暴露引起的神经炎症。结论：循环miR-124具有良好的稳定性、组织特异性和灵敏性，可作为评价铅神经毒性的潜在的生物标志物。

关键词

循环miR-124 / 生物标志物验证 / 灵敏性 / 稳定性 / 组织特异性