DF3/MUC1启动子调控的重组腺病毒的构建及循环肿瘤细胞检测效果的鉴定

摘要

目的：构建含DF3/MUC1启动子转录调控序列和绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）的重组腺病毒（Ad-DF3-copGFP），探讨其在循环肿瘤细胞（circulating tumor cell,CTC）检测方面的作用。方法：制备并纯化重组腺病毒（Ad-DF3-copGFP），与本实验室构建保存的重组腺病毒（Ad-hTERT-copGFP）进行对比研究，通过感染肺腺癌A549、H1299细胞及健康人外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）以评估感染效率与非特异性感染率；将A549细胞按一定数量加入到健康人外周血中来模拟CTC，使用两种重组病毒感染并检测模拟CTC细胞以进行检出率测定；使用Ad-DF3-copGFP法及Ad-hTERT-copGFP法检测肺癌患者临床样本中的CTC，初步评估临床CTC检测的效果。结果：成功构建了重组腺病毒Ad-DF3-copGFP，其对A549、H1299细胞有较高感染效率，且与Ad-hTERT-copGFP相比，Ad-DF3-copGFP非特异性感染率更低（P <0.001）;Ad-DF3-copGFP法模拟CTC检出率（77.3%）高于Ad-hTERT-copGFP法（69.6%）；在临床CTC检测中，Ad-DF3-copGFP法CTC检出数[每4 mL(10.90±2.42)个]明显高于Ad-hTERT-copGFP法[每4 m L(6.20±1.81)个，P <0.001]。结论：成功构建重组腺病毒（Ad-DF3-copGFP），其检测CTC具有可靠性和高效性，为CTC检测提供了新方法。

关键词

循环肿瘤细胞 / DF3/MUC1 / 腺病毒

基金资助

江苏省青年医学重点人才培养项目（QNRC2016054）