脑痰清在AD小鼠神经干细胞增殖中的作用和机制

摘要

目的：研究脑痰清（Nao Tan Qing,NTQ）对阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）小鼠中神经干细胞增殖的影响，并探究其分子机制。方法：将五转家族性阿尔茨海默病模型小鼠（transgenic mice with five familial Alzheimer’s disease,5×FAD小鼠）随机分为两组：AD组、AD+NTQ组，分别使用去离子水或NTQ灌胃处理；利用免疫荧光染色、实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法等检测海马区神经干细胞增殖情况；体外分离培养C57/BL6J小鼠胚胎神经干细胞，分别使用PBS、NTQ处理细胞，利用CCK-8法检测细胞增殖情况，TUNEL检测细胞凋亡，使用免疫荧光染色检测Y染色体性别决定区（sex-determing region of Y chromosome,SRY）盒转录因子2（SRY-box transcription factor 2,SOX2）阳性、5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2-deoxy uridine,BrdU）阳性及双皮质素（doublecortin,DCX）阳性细胞，通过实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测SOX2、DCX表达。利用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测cyclin D1、p27/Kip1及GATA2的表达情况；使用cyclin D1-细胞周期依赖性蛋白激酶（cyclin-dependent kinase,CDK）抑制剂体外处理神经干细胞后，通过实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测SOX2表达水平。结果：与AD组相比，AD+NTQ组小鼠海马区SOX2⁺细胞数量增多、SOX2 mRNA及蛋白水平显著增加；NTQ处理神经干细胞后，神经球直径显著增加，BrdU⁺、SOX2⁺及DCX⁺细胞数目增加，SOX2、DCX mRNA水平增加，SOX2蛋白水平显著增加。AD+NTQ组小鼠海马区GATA2及下游分子p27/Kip1表达下降，对cyclin D1的抑制作用减弱，使细胞发生增殖。添加cyclin D1-CDK抑制剂可减弱NTQ所引发的SOX2、DCX表达量增加。结论：NTQ通过调控GATA2-p27/Kip1-cyclin D1信号通路，维持神经干细胞增殖，改善AD小鼠认知障碍。

关键词

阿尔茨海默病 / 脑痰清 / 神经干细胞 / 细胞增殖