Sublytic C5b-9上调KLF5促进Thy-1肾炎大鼠肾小球系膜细胞生成IL-23的作用

摘要

目的：研究亚溶解型C5b-9(sublytic C5b-9)上调转录因子Krüppel样因子5(Krüppel-like factor 5,KLF5)促进Thy-1肾炎（Thy-1 nephritis,Thy-1N）大鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cell,GMC）产生炎症因子白细胞介素（interleukin,IL）-23的作用。方法：(1)建立大鼠Thy-1N模型和体外培养大鼠GMC，用Western blot(WB)检查Thy-1N大鼠肾组织和受sublytic C5b-9刺激的GMC中KLF5和IL-23的表达。(2)分别将KLF5过表达质粒（pIRES2-KLF5）或KLF5小干扰质粒（shKLF5）转染GMC，通过实时荧光定量PCR和WB检测KLF5和IL-23的mRNA和蛋白水平。(3)将IL-23全长启动子荧光素酶报告基因质粒（p GL3-IL-23-FL）转染GMC，再给予sublytic C5b-9刺激，或将p GL3-IL-23-FL与pIRES2-KLF5或shKLF5共转染GMC，用荧光素酶报告基因实验检测IL-23启动子活性的变化。(4)将慢病毒（lentivirus,LV）包装的LV-shKLF5和LV-shCTR行肾动脉灌注术导入大鼠肾组织，经小动物脏器可见光三维成像和冰冻切片观察GFP表达，证实LV-shCTR在肾组织中富集效率。之后再复制大鼠Thy-1N，用WB检查肾组织中KLF5和IL-23的蛋白表达。结果：(1)Thy-1N大鼠的肾组织和sublytic C5b-9刺激的GMC中，KLF5和IL-23的表达均显著升高，且KLF5的表达高峰稍早于IL-23。(2)在GMC中过表达或敲低KLF5能分别引起IL-23表达的升高或降低。(3)Sublytic C5b-9刺激或KLF5过表达均可增加GMC中IL-23启动子的活性，但敲低KLF5后可明显下调由sublytic C5b-9刺激GMC诱导的IL-23启动子活性。(4)敲低Thy-1N大鼠肾组织中KLF5的表达后，其肾组织中IL-23的表达水平明显降低。结论：大鼠Thy-1N发病早期，sublytic C5b-9刺激GMC后可通过上调KLF5促进IL-23基因的转录与表达。

关键词

Thy-1肾炎 / 亚溶解型C5b-9 / 肾小球系膜细胞 / krüppel样因子5 / 白细胞介素-23