4-羟基过氧环磷酰胺通过靶向P53损伤人卵巢颗粒细胞线粒体自噬功能的研究

摘要

目的：探讨环磷酰胺体外活化物4-羟基过氧环磷酰胺（4-hydroperoxy cyclophosphamide,4-HC）导致人卵巢颗粒细胞系SVOG功能损伤的效应及机制。方法：以0.2、2.0、10.0μmol/L的4-HC处理SVOG细胞24、48、72 h,CCK-8法检测各组细胞的细胞活力变化，选择构建损伤模型的时间和浓度；Western blot、RT-qPCR法检测各组线粒体自噬通量的变化；透射电镜观察正常组和4-HC损伤组线粒体的变化；RT-qPCR检测P53相关基因的表达；免疫荧光法检测各组P53蛋白，Parkin蛋白以及线粒体外膜蛋白（translocase of outer mitochondrial membrane 20,TOMM20）的表达水平。结果：在体外建立了2.0μmol/L 4-HC处理SVOG细胞48 h诱导的损伤模型。4-HC损伤的SVOG细胞中，线粒体自噬通量受到抑制且线粒体形态异常，受损线粒体明显增加；P53的表达水平明显增加；且存在胞质中P53和Parkin蛋白结合增加，而线粒体外膜蛋白TOMM20和Parkin蛋白的结合受到抑制。结论：在体外，4-HC可能是通过P53-Parkin通路抑制受损线粒体自噬导致人卵巢颗粒细胞受损。

关键词

4-羟基过氧环磷酰胺 / P53 / 线粒体自噬