瘦素激活PI3K/AKT信号促进小鼠心肌细胞衰老的初步研究

摘要

目的：探讨瘦素在小鼠心肌细胞（mouse cardiomyocyte,MCM）衰老中的作用及调控机制。方法：qPCR检查瘦素刺激后MCM中衰老相关指标p16、p21和衰老相关分泌表型（senescence-associated secretory phenotype,SASP）的mRNA表达量；Western blot检测p16、p21、γ-H2AX、PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT的蛋白表达量；β-半乳糖苷酶染色检测MCM衰老。PI3K抑制剂（LY294002）预处理2 h后再给予瘦素刺激，qPCR和Western blot检测p16和p21的m RNA和蛋白表达水平；qPCR检查SASP的mRNA表达水平；β-半乳糖苷酶染色检测MCM衰老。结果：瘦素刺激MCM后，p16和p21的m RNA及蛋白表达增加，同时γ-H2AX的蛋白水平也显著上升，SASP[白介素（interleukin,IL）-1β、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）-α、IL-6和单核细胞趋化蛋白（monocyte chemoattractant protein,MCP）-1）]的mRNA水平上调，PI3K/AKT信号通路的蛋白磷酸化水平升高，β-半乳糖苷酶染色显示MCM发生衰老。PI3K抑制剂预处理2 h后，p16和p21的m RNA和蛋白水平明显降低，同时γ-H2AX的蛋白水平也显著下调；SASP mRNA水平降低；β-半乳糖苷酶染色显示MCM衰老缓解。结论：瘦素通过活化PI3K/AKT信号通路分泌SASP(IL-1β、TNF-α、IL-6和MCP-1)调控MCM衰老的发展进程。

关键词

瘦素 / 心肌细胞 / 细胞衰老