双调蛋白通过上调LPA-LPAR3调控肠成纤维细胞活化促进克罗恩病肠纤维化

摘要

目的：探讨双调蛋白（amphiregulin,AREG）在克罗恩病（Crohn’s disease,CD）相关肠道纤维化发生和发展中的潜在作用机制。方法：以100 ng/mL浓度的AREG处理人肠成纤维细胞48 h后，利用转录组学测序筛选差异表达基因，探究AREG参与肠纤维化形成的可能机制；收集因肠纤维化并发肠梗阻行手术治疗的CD患者的狭窄部位及非狭窄部位的肠道标本以及血浆进行临床验证；通过Ki67免疫荧光和划痕实验评估人肠成纤维细胞的增殖和迁移能力，并通过qRT-PCR及Western blot检测Col1a1、Col6a1、Col6a3等基因表达和α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）等蛋白表达水平的变化。结果：RNA-seq数据分析显示AREG促进人肠成纤维细胞表达溶血磷脂酸受体3(lysophosphatidic acid receptor 3,LPAR3)，临床样本验证发现，LPAR3在纤维化部位组织中表达增加，且与未合并肠道纤维化的CD患者相比，合并肠道纤维化的CD患者的血浆溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）水平升高；体外细胞实验发现，AREG促进人肠成纤维细胞分泌LPA,LPA在蛋白水平上调人肠成纤维细胞LPAR3的表达；此外，LPA促进肠成纤维细胞的迁移、增殖、活化及胶原蛋白的产生，LPAR3抑制剂可减轻LPA对细胞的上述影响。结论：AREG可能通过LPA-LPAR3途径促进CD相关肠道纤维化的发生，AREG-LPA-LPAR3可能是治疗肠道纤维化的潜在靶点。

关键词

双调蛋白 / 克罗恩病 / 肠道纤维化 / 溶血磷脂酸