环磷酰胺对卵母细胞发育潜能影响的研究

摘要

目的：探究环磷酰胺活性代谢物4-羟基环磷酰胺（4-hydroxycyclophosphamide,4-HC）对卵母细胞质量的影响及机制。方法：将小鼠生发泡（germinal vesicle,GV）期卵丘卵母细胞复合体（cumulus-oocyte complex,COC）随机分为8组，空白对照组不做处理，溶剂对照组中添加与实验组相同浓度溶剂DMSO，实验组中分别加入终浓度为0.3、1.0、3.0、10.0、30.0、100.0μmol/L的4-HC，观察各组COC在体外培养后的第一极体排出率、二细胞率、囊胚率，最终确定实验组最佳浓度。检测1μmol/L浓度下卵母细胞内活性氧水平、线粒体膜电位水平、还原型谷胱甘肽水平等以评估卵母细胞质量。RT-qPCR、免疫荧光等检测4-HC对卵母细胞DNMT3A表达的影响。结果：随着4-HC浓度的增加，各组卵母细胞2-细胞率相当或略有下降，实验组卵母细胞受精后囊胚率随4-HC浓度增加而降低（P <0.05）。1μmol/L 4-HC下，小鼠卵母细胞线粒体膜电位下降、细胞内超氧化物阴离子含量上升、还原型谷胱甘肽含量下降（P均<0.05）且囊胚形成率下降（0.809±0.087 vs. 0.566±0.175,P <0.05）,RT-qPCR及免疫荧光结果显示卵母细胞DNMT3A表达增加（P <0.05）。结论：4-HC会引发卵母细胞发生氧化应激，线粒体损伤，导致其发育潜能降低，并对卵母细胞表观遗传产生影响。

关键词

氧化应激 / 表观遗传 / 环磷酰胺 / 谷胱甘肽 / 卵母细胞