RNA结合蛋白RBMS3通过稳定p21 mRNA抑制乳腺癌增殖

摘要

目的：探讨RNA结合基序单链作用蛋白3(RNA binding motif single stranded interacting protein 3,RBMS3)在乳腺癌增殖中的作用及其在转录后水平调控细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(cyclin-dependent kinase inhibitor 1A,CDKN1A，又称p21)稳定性的分子机制。方法：在体外通过集落形成和5-乙炔基-2’-脱氧尿苷（5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU）掺入实验检测细胞增殖能力；流式细胞术分析细胞周期分布和凋亡率；构建裸鼠皮下移植瘤模型，观察RBMS3对体内肿瘤生长的作用。采用蛋白质印迹法、实时荧光定量聚合酶链式反应和免疫组化分析RBMS3与p21的表达相关性；进一步采用放线菌素D实验验证RBMS3对p21稳定性的影响；通过RNA结合蛋白免疫沉淀实验、双荧光素酶实验和回复实验，证实RBMS3与p21的直接结合及相互作用。结果：RBMS3过表达可抑制乳腺癌细胞增殖和裸鼠移植瘤的生长，诱导G0/G1期细胞阻滞并促进细胞凋亡；反之，RBMS3敲降可促进乳腺癌细胞增殖。此外，RBMS3与p21呈显著正相关，且RBMS3可直接结合p21 mRNA的3′非翻译区（3′-untranslated region,3′-UTR）AU富集元件（AU-rich element,ARE），提高p21mRNA的稳定性；敲降p21可逆转RBMS3对乳腺癌增殖的抑制作用。结论：RBMS3通过直接结合p21 3′-UTR的ARE并增强p21 mRNA的稳定性，上调p21的表达，进而抑制乳腺癌细胞的增殖。上述发现提示RBMS3可能成为乳腺癌治疗的潜在靶点。

关键词

RBMS3 / p21 / mRNA稳定性 / 乳腺癌

基金资助

国家自然科学基金（82303044）