菲牛蛭副产物抗凝血水解肽筛选及其体内抗血栓活性研究

摘要

为提高菲牛蛭（Poecilobdella manillensis）加工副产物的资源化利用价值，以提取抗凝活性物质后的菲牛蛭副产物冻干粉为原料，比较胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解产物的体外抗凝活性，筛选适宜水解酶，并采用FeCl₃诱导的小鼠颈总动脉急性血栓模型评价其体内抗血栓活性.结果显示，胃蛋白酶水解产物抗凝活性达到2 200 U/g,明显高于未酶解副产物及其他酶解组.经超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）鉴定与分子对接方法筛选后，从胃蛋白酶水解产物中获得9条主要肽段，其中WDGWTSG和WSAPLR与凝血酶（PDB ID:2BVR）对接结合能分别为-39.36 kJ/mol和-37.68 kJ/mol,表明这两个肽具有较好的凝血酶结合能力.动物实验表明，胃蛋白酶水解产物可增加小鼠断尾失血量，并在FeCl₃诱导的血栓模型中延长凝血酶原时间（Prothrombin Time, PT）和活化部分凝血活酶时间（Activated Partial Thromboplastin Time, APTT）,调节纤维蛋白原（Fibrinogen, FIB）水平，最终减轻颈总动脉血栓的形成.在单次给药条件下，血清生化指标和主要器官H&E染色未见明显急性毒性相关损伤.研究为菲牛蛭加工副产物中抗凝血肽的筛选及高值化利用提供了实验依据.

关键词

菲牛蛭副产物 / 抗凝血肽 / UPLC-MS/MS / 分子对接 / FeCl₃诱导颈总动脉血栓 / 抗血栓活性

基金资助

云南省重大科技专项计划课题(202302AA310035-1)