裂谷热病毒核衣壳蛋白的表达及兔源多克隆抗体的制备

摘要

目的 原核表达及纯化裂谷热病毒（RVFV）核衣壳蛋白（NP）,为检测血清中的NP抗体奠定基础，并制备针对NP的多克隆抗体。方法 将构建的pET28a-ZH501-NP原核表达质粒转化至BL21（DE3）感受态细胞中，并采用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组蛋白NP的表达。将重组蛋白NP用HisTrap^TM HP纯化后与弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂混合免疫新西兰大白兔，制备NP多克隆抗体，通过间接免疫荧光（IFA）和Western blot法鉴定多克隆抗体的特异性。结果 成功构建原核表达质粒，在BL21（DE3）感受态细胞中成功诱导表达，且重组蛋白NP以包涵体形式表达。Western blot法和IFA鉴定表明多克隆抗体能特异性识别RVFV NP。结论 成功表达纯化RVFV NP蛋白，探索了其作为包被抗原的间接ELISA实验条件，同时制备了针对RVFV NP的特异性多克隆抗体，为建立可靠的RVF快速诊断技术、研发和评价RVFV新型疫苗提供了提供技术支撑。

关键词

多克隆抗体 / 裂谷热病毒(RVFV) / 核衣壳蛋白(NP)

基金资助

国家重点研发计划(2022YFC2604202); 国家自然科学基金面上项目(32570160)