桂楼复方对子宫腺肌病异位内膜细胞迁移和侵袭的影响研究

摘要

背景 子宫腺肌病（AM）是妇科常见的疑难病，但其具体机制尚未明确。中医药治疗AM有一定优势，前期研究显示，桂楼复方宫内缓释系统可明显降低AM模型大鼠子宫内膜细胞增殖、侵袭能力。目的 探讨桂楼复方对子宫腺肌病异位内膜细胞（AMDC）迁移、侵袭的影响，并研究其对Rho/ROCK信号通路的影响。方法 本研究于2021年10月—2023年4月在山东中医药大学附属医院实验中心完成。使用CCK-8法检测AMDC细胞活力并筛选最佳药物浓度。设置空白组，使用桂楼复方（50、100 mg/L）处理AMDC，划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell实验检测细胞侵袭能力，免疫印迹法Western Blotting）/实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测RhoA、RhoB、RhoC、ROCK1、ROCK2在蛋白和mRNA水平的表达情况。Rescue实验中使用激动剂U-46619(1μmol/L)和桂楼复方（100mg/L）处理AMDC,Western Blotting法检测RhoA、RhoB、RhoC、ROCK1、ROCK2的蛋白表达改变情况。结果 与空白组比较，100 mg/L桂楼复方干预后AMDC细胞存活率未明显降低，差异无统计学意义（P>0.05），是不影响细胞活性的最佳药物浓度。选取50、100 mg/L桂楼复方进行后续实验。与空白组比较，桂楼复方50 mg/L、100 mg/L组AMDC迁移、侵袭能力受到抑制（P<0.001）,RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2的蛋白及mRNA表达水平下调（P<0.001）,U-46619 1μmol/L组RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2的蛋白表达上调（P<0.001）。与U-46619 1μmol/L组比较，U-466191μmol/L联合桂楼复方100 mg/L组RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2的蛋白表达下调（P<0.001）。空白组与桂楼复方50 mg/L、100 mg/L组RhoB的蛋白及mRNA表达水平差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 桂楼复方可有效抑制AMDC的迁移、侵袭能力，不影响细胞活性的最佳药物浓度为100 mg/L，桂楼复方可下调RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2的蛋白及mRNA表达水平，并可逆转U-46619对RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2蛋白表达水平的上调作用，从而抑制AM病局部异位病灶的持续进展，其作用可能与调控Rho/ROCK通路密切相关。

关键词

子宫腺肌病 / 桂楼复方 / 子宫内膜 / 子宫腺肌病异位内膜细胞 / 迁移 / 侵袭 / Rho/ROCK信号通路

基金资助

国家自然科学基金面上项目（81873330）; 山东省泰山学者工程泰山学者青年专家（tsqn201909185）; 山东省自然科学基金（ZR2021MH198）; 山东省中医药科技项目（2021M186）