Zeste同源物2增强子在桥本甲状腺炎B淋巴细胞亚群中的表达及其抑制剂的治疗机制及效果研究

摘要

背景 甲状腺自身抗体是诊断桥本甲状腺炎（HT）的标志，B淋巴细胞在HT的发病机制中发挥重要作用。Zeste同源物2增强子（EZH2）是一种表观遗传学蛋白，在淋巴细胞的发育与功能调控中扮演重要角色。目的 本研究探讨EZH2在HT甲状腺组浆母细胞及浆细胞中的表达，进一步探讨EZH2抑制剂在实验性自身免疫甲状腺炎（EAT）模型中的治疗作用。方法 收集北京大学第一医院2010—2020年6例行甲状腺手术的患者，取肿瘤对侧的甲状腺组织（HT及正常甲状腺组织各3例），通过RNA-seq筛选B淋巴细胞相关基因的表达情况；收集16例HT患者的甲状腺组织和8例健康对照（HD）甲状腺组织，分别利用免疫组化及免疫荧光验证EZH2在HT甲状腺组织中B淋巴细胞中的表达；收集25例HT甲状腺细针穿刺液（FNA）、19例HT外周血以及12例健康人外周血样本应用流式细胞分析检测EZH2在浆母细胞及浆细胞中的表达改变。将15只7周龄NOD.H-2^h4小鼠EAT模型分为对照组（n=5）、EAT无注射（n=5）或注射EZH2抑制剂GSK126处理组（10 mg/kg，腹腔注射3次/周，n=5）,8周后观察甲状腺炎症程度及甲状腺球蛋白抗体（TgAb）水平的改变。结果 RNA-seq结果显示，相较于正常甲状腺组织，HT甲状腺组织中EZH2水平上调，一些与B淋巴细胞表型相关的基因例如CD19、CD27、CD38、CD52相应增加。免疫组化结果显示，16例HT甲状腺组织标本中EZH2免疫组化染色均可在生发中心（GC）见到阳性细胞，呈强阳性，8例正常甲状腺组织染色中未观察到阳性细胞。HT甲状腺组织中EZH2染色高表达在GC区，EZH2特异性地表达在CD₁₉⁺B淋巴细胞中。流式细胞术检测结果显示HT FNA样本中CD₁₉⁺B淋巴细胞、浆母细胞及浆细胞比例均高于HD外周血、HT外周血样本（P<0.01）,HT FNA样本中EZH2在CD₁₉⁺B淋巴细胞、浆母细胞中的阳性比例高于HT外周血（P<0.005）。小鼠实验中，EAT组甲状腺的淋巴细胞浸润较对照组增加。GSK126处理组炎症程度评分和TgAb水平高于对照组，低于EAT组（P<0.001）。结论 EZH2在HT甲状腺组织CD₁₉⁺B淋巴细胞中表达异常升高，可能促进了B淋巴细胞分化成浆细胞进而促进自身抗体生成破坏甲状腺，EZH2抑制剂可以减缓EAT模型甲状腺炎症程度。浆母细胞中EZH2表达增加可能参与了HT的发病机制，EZH2可能成为治疗HT的新靶点，相关机制需要进一步深入研究。

关键词

桥本甲状腺炎 / B淋巴细胞亚群 / Zeste同源蛋白2增强子 / 甲状腺功能减退症 / 靶向治疗