二陈汤干预ATG7/FTH1通路改善痰湿型多囊卵巢综合征大鼠卵泡功能的研究

摘要

背景 多囊卵巢综合征（PCOS）是一类尚无明确病因的妇科内分泌代谢性疾病，患病率日渐年轻化、普遍化，因此研究PCOS分子生物学层面的发病机制，可为临床治疗提供相关依据，守护女性健康。目的 以中医学“痰湿”体质导致不孕的理论为依据，探讨二陈汤对PCOS卵巢颗粒细胞线粒体自噬依赖性铁死亡的改善作用。方法 辽宁中医药大学实验动物中心提供SPF级实验室及32只SD雌性大鼠，适应性喂养1周后，随机将32只大鼠分为对照组（n=10）和模型组（n=22）。对照组给予普通维持饲料全程喂养，共12周；模型组全程给予高脂饲料喂养，造模期间每日给予来曲唑溶液灌胃。造模完毕选取动情周期紊乱的模型组大鼠作为治疗组（n=12），每日给予二陈汤煎剂灌胃，连续4周进行治疗。取材后对大鼠卵巢进行HE染色，观察病理变化，采用透射电镜拍摄3组大鼠卵巢颗粒细胞线粒体形态学变化，采用Western Blotting法检测大鼠卵巢颗粒细胞自噬相关基因7(ATG7)、P62、自噬相关蛋白1(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅰ（LC3-Ⅰ）、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（LC3-Ⅱ）、铁蛋白重链1(FTH1)、线粒体呼吸链组装蛋白2(ISCU2)蛋白水平变化。采用Oxygraph-2k线粒体功能测定系统检测卵巢颗粒细胞线粒体耗氧率变化。结果 模型组大鼠卵巢囊性卵泡增多，黄体减少并且卵巢颗粒细胞线粒体出现自噬与铁死亡现象，治疗组治疗后形态部分恢复。与对照组相比，模型组ATG7、P62、Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白水平升高（P<0.05）,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ升高（P<0.05）,LC3-Ⅰ、FTH1、ISCU2蛋白水平降低（P<0.05）；与模型组相比，治疗组ATG7、P62、Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白水平降低（P<0.05）,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ降低（P<0.05）,FTH1蛋白水平升高（P<0.05）。三组电子传递系统（ETS）、线粒体复合体Ⅰ（CⅠ）、线粒体复合体Ⅱ（CⅡ）耗氧率比较，差异有统计学意义（P<0.05）；其中模型组ETS、CⅠ、CⅡ耗氧率低于对照组，治疗组ETS、CⅠ、CⅡ耗氧率高于模型组，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 二陈汤通过ATG7/FTH1通路逆转卵巢颗粒细胞自噬依赖性铁死亡，改善痰湿型PCOS大鼠的卵泡功能。

关键词

多囊卵巢综合征 / 二陈汤 / 自噬依赖性铁死亡 / 痰湿不孕 / 线粒体

基金资助

国家自然科学基金青年科学基金项目（82104735）; 辽宁省科技厅重点研发项目（2024JH2/102500043）; 辽宁省教育厅青年科技创新团队项目（2024-JYTCB-083）;辽宁省教育厅基础研究面上项目（JYTMS20231815）; 中国博士后科学基金第71批面上资助项目（2022MD713764）; 中医脏象理论及应用教育部重点实验室开放基金项目（zyzx2202）