基于cAMP/PKA/P-RyR1与胞内钙离子探讨按法干预大鼠肌筋膜触发点的机制

摘要

背景 按法干预触发点是公认有效的缓解疼痛的治疗方法，这体现了中医推拿的舒筋止痛作用，但是目前其作用机制尚未完全阐明。目的 探讨按法对肌筋膜触发点的作用是否与环磷酸腺苷（cAMP）/蛋白激酶A（PKA）/雷诺丁受体1（RyR1）对胞内Ca²⁺的调节有关。方法 将60只SD大鼠按照随机数字表法分为无需造模的空白组大鼠10只和参与触发点造模的大鼠50只，造模大鼠采用钝性击打造模，造模后将符合模型评价标准者随机分配入模型组、按法组、按法+激动剂组与按法+溶剂组。按法组采用按法刺激仪器干预，按法+激动剂组通过腹腔注射8-Bromo-cAMP溶液20 mg/kg，按法+溶剂组注射等量0.9%氯化钠溶液。检测各组大鼠机械痛阈值、软组织张力、肌电图检测。末次肌电图检测结束后麻醉并处死大鼠，收集左侧大腿内侧肌的肌肉紧张带或结节区域，酶联免疫吸附试验检测cAMP含量，蛋白质印迹法检测PKA、P-RyR1和12kDa FK506结合蛋白（FKBP12）蛋白表达，免疫组化法检测磷酸化雷诺丁受体1（P-RyR1），荧光染色法检测胞内Ca²⁺浓度。结果 最终纳入造模成功大鼠40只，模型组、按法组、按法+激动剂组和按法+溶剂组各10只。干预前模型组、按法组、按法+激动剂组和按法+溶剂组机械痛阈值低于空白组（P<0.05），干预后模型组、按法+激动剂组机械痛阈值低于空白组，按法组、按法+激动剂组和按法+溶剂组机械痛阈值高于模型组，按法+激动剂组机械痛阈值低于按法组、按法+溶剂组（P<0.05）。干预前后组内比较结果显示，干预后按法组、按法+激动剂组、按法+溶剂组机械痛阈值高于干预前（P<0.05）。干预前模型组、按法组、按法+激动剂组和按法+溶剂组软组织张力D0.2低于空白组（P<0.05），干预后模型组、按法+激动剂组软组织张力D0.2低于空白组（P<0.05），按法组、按法+激动剂组、按法+溶剂组软组织张力D0.2高于模型组（P<0.05），按法+激动剂组、按法+溶剂组软组织张力D0.2高于按法+激动剂组（P<0.05）。干预前后组内比较结果显示，干预后按法组、按法+溶剂组软组织张力D0.2高于干预前（P<0.05）。肌电图检测结果显示，模型组、按法组、按法+激动剂组、按法+溶剂组肌电图振幅与频率均高于空白组（P<0.05），按法组、按法+激动剂组、按法+溶剂组肌电图振幅与频率均低于模型组（P<0.05），按法+激动剂组肌电图振幅与频率均高于按法组、按法+溶剂组（P<0.05）。酶联免疫吸附试验结果显示，模型组、按法+激动剂组cAMP高于空白组（P<0.05），按法组、按法+激动剂组、按法+溶剂组cAMP低于模型组（P<0.05），按法+激动剂组cAMP高于按法组、按法+溶剂组（P<0.05）。蛋白质印迹法结果显示，模型组、按法+激动剂组PKA、P-RyR1和FKBP12高于空白组（P<0.05），按法组、按法+溶剂组PKA、P-RyR1和FKBP12低于模型组（P<0.05），按法+激动剂组PKA、P-RyR1和FKBP12高于按法组、按法+溶剂组（P<0.05）。免疫组化染色结果显示，模型组、按法+激动剂组P-RyR1 IOD高于空白组（P<0.05），按法组、按法+溶剂组P-RyR1IOD低于模型组（P<0.05），按法+激动剂组P-RyR1 IOD高于按法组、按法+溶剂组（P<0.05）。免疫荧光检测结果显示，模型组、按法组、按法+激动剂组、按法+溶剂组平均荧光强度高于空白组（P<0.05），按法组、按法+激动剂组、按法+溶剂组平均荧光强度低于模型组（P<0.05），按法+激动剂组平均荧光强度高于按法组、按法+溶剂组（P<0.05）。结论 触发点局部按法干预可能通过抑制cAMP/PKA/P-RyR1，促使胞内Ca²⁺浓度下降，从而舒展异常收缩肌节缓解疼痛。

关键词

肌筋膜疼痛综合征 / 肌筋膜扳机点痛 / 推拿疗法 / 环磷酸腺苷/蛋白激酶A/雷诺丁受体1信号通路

基金资助

国家自然科学基金资助项目（82174526,82274676,82374613）; 湖南省自然科学基金资助项目（2023JJ30458）; 湖南省科技创新计划项目（2022RC1221）