CRISPR-Cas9对新生儿血流感染多重耐药肺炎克雷伯菌干预研究

黄昕明; 邬剑; 曹凤宇; 王树慧; 钱佳莉; 郑鸿舒; 王晓波; 谭盛玉; 陈冰; 李慧玲

黑龙江医药科学 ›› 2026, Vol. 49 ›› Issue (10) : 1 -4+16.

黄昕明, 邬剑, 曹凤宇, 王树慧, 钱佳莉, 郑鸿舒, 王晓波, 谭盛玉, 陈冰, 李慧玲

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摘要

目的：探讨CRISPR-Cas9基因编辑系统对新生儿血流感染（NBSI）来源耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（CRKP）中bla_KPC-2耐药基因的靶向敲除作用，为新生儿多重耐药血流感染提供新型精准干预策略。方法：收集2023年1月至2024年12月某三级甲等妇幼保健院的新生儿重症监护室（NICU）血培养分离的碳青霉烯肺炎克雷伯菌株，采用PCR及全基因组测序进行bla_KPC-2基因鉴定；针对bla_KPC-2基因序列设计特异性gRNA,构建pCas9-gRNA重组质粒，经电转化导入编辑CRKP的KPC-2基因；应用微量肉汤稀释法测定编辑前后菌株对亚胺培南、头孢他啶、阿米卡星、环丙沙星的最低抑菌浓度（MIC）;绘制生长曲线、结晶紫染色法检测生物膜形成能力；RT-PCR法检测bla_KPC-2基因相对表达水平。结果：收集KP菌株76株，其中CRKP菌株11株，bla_KPC-2阳性菌株9株，bla_KPC-2阳性率为81.82%（9/11）;成功构建靶向bla_KPC-2基因的CRISPR-Cas9编辑系统，电转化阳性克隆经鉴定基因敲除效率为18.18%（2/11）;编辑后菌株对亚胺培南MIC由16μg/mL降至1μg/mL,由耐药转为敏感，头孢他啶、阿米卡星敏感性同步提升；编辑前后菌株生长速率及生物膜形成能力差异无统计学意义（P>0.05）;编辑后bla_KPC-2相对表达量较原始菌株显著下调（P<0.01）。结论：CRISPR-Cas9可高效、精准敲除新生儿血流感染CRKP的bla_KPC-2耐药基因，逆转碳青霉烯耐药表型，且不显著影响菌株基础生长与生物膜形成能力，为新生儿多重耐药菌感染的精准治疗提供依据。