4种常见食源性病原菌多重PCR检测技术研究

摘要

为了解决常规方法检测食源性病原菌存在操作繁琐、周期长的问题，基于4种常见食源性病原菌特异基因序列扩增提出了一种快速、高效的多重PCR(multiplex polymerase chain reaction, MPCR)检测方法。根据单增李斯特菌iap基因、蜡样芽孢杆菌gyrB基因、产志贺毒素大肠埃希氏菌stxⅠ基因、肠炎沙门氏菌invA基因的特异序列分别设计引物后建立MPCR反应体系，测试其特异性、敏感性和可行性，并与国标培养法进行比较。结果表明：MPCR扩增出4个目标基因的特异性条带大小依次为371、221、432、171 bp;在58℃的退火温度下，MPCR扩增表现出良好的特异性，无非特异性扩增，4种病原菌最低检出限达到10～2 CFU/mL;MPCR方法和国标培养法对多种食源性病原菌感染的牛奶样品的检测结果完全一致，检测周期由原来的5～7 d缩减到8～9 h。所建立的MPCR技术作为一种快速、高效的检测方法，可为食品安全生产提供保障。

关键词

食品检验学 / 多重PCR(MPCR) / 单增李斯特菌 / 蜡样芽孢杆菌 / 产志贺毒素大肠埃希氏菌 / 肠炎沙门氏菌