基于ARMS-PCR技术检测SLC39A13基因核苷酸多态性方法的建立

摘要

为了实现核苷酸多态性（SNP）的精准分型，针对SLC39A13基因rs755555位点，建立基于荧光定量PCR的分子诊断技术。首先，分别设计rs755555位点及内参基因peptidylprolyl isomerase A（PPIA）的Taqman荧光ARMS-PCR检测引物和探针；其次，构建阳性对照质粒；最后，以基因分型精确度为指标，优化引物探针组合，以及检测试剂的PCR反应体系和反应条件。结果表明：野生型最优引物探针组合为WF1、R1、FP1、PIRF5、PIRR5、PIRP5,突变型最优引物探针组合为FMF3、R1、FP1、PIRF5、PIRR5、PIRP5;每个检测样品的最优反应体系为SLC39A13基因上下游引物探针各0.1μL,内标上下游引物探针各0.1μL,10μL PerfectStart^?ⅡProbe qPCR SuperMix UDG,5.4μL纯水，4μL样品基因组。重复性实验和70个样品的检测验证，确认了检测体系的可行性，为研发SLC39A13基因rs755555位点多态性检测试剂盒提供了技术基础。

关键词

分子生物学 / 人SLC39A13基因 / ARMS-PCR / 核苷酸多态性检测 / 实时荧光定量PCR