毕赤酵母分泌型遗传操作工具的构建与优化

摘要

为了解决毕赤酵母遗传操作效率低且流程繁琐的问题，提高其应用价值，构建并优化了分泌型遗传操作工具。首先，以α-淀粉酶为报告蛋白，通过融合自主复制序列构建非整合型表达质粒；其次，借助通用引物和POE-PCR,快速筛选评估与目的蛋白最匹配的内源信号肽；最后，构建以亚磷酸盐为唯一磷源的营养依赖型筛选标记。结果表明：2种非整合型质粒表达α-淀粉酶的酶活分别是整合型质粒的2倍和1.6倍；以FLO10、EXG1和MSB 2为信号肽引导的α-淀粉酶酶活分别是常规信号肽α-MF的2.5倍、1.94倍和1.75倍；亚磷酸脱氢酶基因(ptxD)成功筛选出异源表达α-淀粉酶的重组菌株。研究简化了基因操作流程，改进了遗传操作工具，开发的绿色安全且低成本的营养依赖型筛选标记，有助于毕赤酵母分泌表达系统的应用和推广。

关键词

合成生物学 / 毕赤酵母 / 分泌表达 / 复制子 / 信号肽 / 筛选标记