LINC00638下调抑制Nrf2/ARE通路参与类风湿性关节炎相关间质性肺病发展

摘要

目的 筛选类风湿性关节炎相关间质性肺病（rheumatoid arthritis associated interstitial lung disease,RA-ILD相关的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)并探讨其作用机制。方法 收集RA-ILD患者（n=3）、RA无肺部受累患者（n=3）及健康对照受试者（n=3）的外周血，进行二代测序，从中筛选出表达存在显著差异的lncRNA。采用转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)诱导人胚肺细胞系MRC-5建立人肺纤维化细胞模型。通过小干扰RNA技术敲减目标基因后，采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应（real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR）测定炎症因子及氧化还原相关基因的变化，蛋白质印记及双荧光素酶报告（dualluciferase reporter,DLR）实验验证氧化应激调控分子的蛋白水平、泛素化水平、核转位情况及抗氧化反应元件（antioxidant response element,ARE）的转录活性。通过回补实验，验证目标lncRNA在肺纤维化细胞系氧化应激与炎症中的作用。结果 高通量测序显示LINC00638在RA-ILD患者中显著低表达。LINC00638敲减后，白细胞介素（interleukin,IL）-4、氧化应激分子核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、超氧化物歧化酶2(superoxide dismutase 2,SOD2)的转录水平显著降低，而IL-6、IL-1、干扰素（interferon,IFN）-γ的转录水平及活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平明显上升。敲减LINC00638后，Nrf2的蛋白表达水平显著降低、泛素化水平升高、核转位减少，下游ARE的转录起始活性下降。在MRC-5细胞系中敲减LINC00638，并加入N-乙酰半胱氨酸后，Nrf2、HO-1水平上调，IL-6水平下调。结论 LINC00638通过激活抗氧化信号通路Nrf2/ARE，抑制RA-ILD中炎症反应的发生发展，或可作为疾病诊治的潜在靶点。

关键词

LINC00638 / 类风湿性关节炎 / 间质性肺病 / 氧化应激