Tepp-46对系统性硬皮病皮肤纤维化的影响

摘要

目的 探讨丙酮酸激酶同工酶M2(pyruvate kinase M2, PKM2)激动剂Tepp-46对系统性硬皮病（systemic scleroderma, SSc）患者皮肤纤维化的影响以及对SSc小鼠模型的治疗作用。方法 取SSc患者及健康对照者全层皮肤组织，采用免疫组化染色技术检测PKM2蛋白与α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA）表达水平。提取皮肤原代成纤维细胞，用Western印迹法检测细胞PKM2蛋白水平。用不同浓度的Tepp-46刺激SSc成纤维细胞，通过Western印迹法检测PKM2、Ⅰ型胶原蛋白α1(collagen typeⅠα1, ColⅠα1)、α-SMA蛋白水平变化。随机将C57BL/6小鼠分为对照组、博来霉素（bleomycin, BLM）造模组、Tepp-46治疗组，通过皮下注射BLM构建SSc小鼠模型，同时Tepp-46治疗组启动治疗。造模后21 d处死小鼠并取其皮肤，通过HE染色、Masson染色分析小鼠皮肤与胶原纤维形态变化。采用免疫组化染色检测小鼠皮肤组织中PKM2、α-SMA蛋白表达水平。采用Western印迹法检测小鼠皮肤组织中ColⅠα1与PKM2蛋白表达水平。结果 与健康对照者相比，SSc患者真皮层内α-SMA蛋白表达水平升高，表皮层及真皮层内PKM2蛋白表达水平升高（P<0.000 1）。SSc患者皮肤原代成纤维细胞PKM2蛋白表达水平高于健康对照者（P<0.01）;Tepp-46刺激后，SSc成纤维细胞ColⅠα1与α-SMA表达水平降低（P<0.01）,PKM2蛋白表达无明显变化。小鼠皮肤HE染色、Masson染色结果显示，与BLM造模组相比，Tepp-46治疗组小鼠皮肤纤维化改变缓解。免疫组化染色结果显示，Tepp-46治疗组小鼠皮肤PKM2、α-SMA蛋白表达水平较BLM造模组降低（P<0.000 1）。Western印迹结果显示，Tepp-46治疗组小鼠皮肤组织中ColⅠα1表达量较BLM造模组降低（P<0.001）。结论 在SSc皮肤组织及成纤维细胞中PKM2蛋白表达上调，PKM2激动剂Tepp-46可抑制SSc皮肤纤维化。

关键词

丙酮酸激酶同工酶M2 / 系统性硬皮病 / 代谢 / Tepp-46