miR-100-5p对急性髓系白血病细胞增殖及凋亡的影响及其分子机制

摘要

目的 探讨微小RNA（miRNA, miR）-100-5p靶向Tribbles同源蛋白1（Tribbles pseudokinase 1,TRIB1）对急性髓系白血病细胞增殖及凋亡活性的影响。方法 收集16例健康体检儿童（对照组）和16例AML患儿（AML组）外周血。将HL-60细胞分为空白组、mimic NC组、miR-100-5p mimic组、si-NC组、si-TRIB1组、miR-100-5p mimic+TRIB1过表达质粒阴性对照（OE-NC）组、miR-100-5p mimic+TRIB1过表达质粒（OE-TRIB1）组。采用实时荧光定量PCR检测外周血和HL-60细胞中miR-100-5p、TRIB1 mRNA表达；5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷（5-ethynyl-2'-deoxyuridine, EdU）染色、CCK-8法检测HL-60细胞增殖；流式细胞术检测HL-60细胞凋亡；Western blot法检测HL-60细胞中TRIB1、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen, PCNA）、p53、程序性死亡受体-1（programmed cell death protein 1, PD-1）、程序性死亡受体-配体1（programmed death-ligand 1, PD-L1）蛋白表达；双萤光素酶报告基因实验验证miR-100-5p与TRIB1靶向关系。结果 与对照组比较，AML组外周血中miR-100-5p表达降低，TRIB1 mRNA表达升高（P<0.05）。与空白组、mimic NC组比较，miR-100-5p mimic组miR-100-5p表达、细胞凋亡率、p53蛋白表达升高，TRIB1 mRNA表达、EdU阳性率、光密度（optical density,OD）₄₅₀值及TRIB1、PCNA、PD-1、PD-L1蛋白表达降低（P<0.05）；与空白组、si-NC组比较，si-TRIB1组TRIB1mRNA表达、EdU阳性率、OD₄₅₀值及TRIB1、PCNA、PD-1、PD-L1蛋白表达降低，细胞凋亡率、p53蛋白表达升高（P<0.05）；与miR-100-5p mimic组、miR-100-5p mimic+OE-NC组比较，miR-100-5p mimic+OE-TRIB1组TRIB1mRNA表达、EdU阳性率、OD₄₅₀值及TRIB1、PCNA、PD-1、PD-L1蛋白表达升高，细胞凋亡率、p53蛋白表达降低（P<0.05）;TRIB1-WT+miR-100-5p mimic组萤光素酶活性低于TRIB1-WT+mimic NC组（P<0.05）。结论 过表达miR-100-5p可通过下调TRIB1抑制HL-60细胞增殖，诱导细胞凋亡。

关键词

微小RNA-100-5p / Tribbles同源蛋白1 / 急性髓系白血病 / 增殖 / 凋亡 / HL-60细胞