miR-146b-5p在高氧诱导的新生大鼠肺血管重塑中的作用：基于铁死亡的调控机制

摘要

目的探讨mi R-146b-5p在高氧诱导的新生大鼠支气管肺发育不良相关肺动脉高压（bronchopulmonary dysplasia-associated pulmonary hypertension, BPD-PH）肺血管重塑中的作用及机制。方法 选取32只Sprague-Dawley新生大鼠，随机分为常氧组、BPD-PH组、过表达组和抑制剂组，每组8只。常氧组于21%氧浓度环境中饲养，其余3组置于85.0%±0.5%的高氧箱中构建BPD-PH模型。其中过表达组经尾静脉注射腺病毒ADV1-miR-146b-5p，抑制剂组注射miR-146b-5p抑制剂。建模14 d后，采用共聚焦显微镜观察腺病毒在肺组织中的转染效率；采用直接测压法测定右心室收缩压（right ventricular systolic pressure, RVSP），分离右心室组织称重并计算右心室肥厚指数（right ventricular hypertrophy index, RVHI）；苏木精-伊红染色观察肺血管形态并计算血管中膜厚度百分比（medial thickness percentage, MT%）、血管中膜面积百分比（medial area percentage, MA%）；透射电子显微镜观察肺血管内皮细胞线粒体的超微结构；3,3'-二氨基联苯胺普鲁士蓝染色和亚铁离子试剂盒检测肺组织铁沉积水平；实时荧光定量PCR检测核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2, Nrf2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4, GPX4)、溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member11, SLC7A11)、长链酰基辅酶A合成酶4(acyl-CoA synthetase long-chain family member 4, ACSL4) mRNA表达水平，免疫印迹法检测Nrf2、GPX4、SLC7A11、ACSL4蛋白表达水平。结果 与常氧组比较，BPD-PH组新生大鼠RVSP升高，RVHI、MT%、MA%增大，线粒体肿胀，铁沉积增多，Nrf2、GPX4、SLC7A11 mRNA及蛋白表达下调，ACSL4 mRNA及蛋白表达上调（P<0.05）。与BPD-PH组比较，过表达组新生大鼠RVSP升高，RVHI、MT%、MA%增大，线粒体重度肿胀，铁沉积明显增多，Nrf2、GPX4、SLC7A11 mRNA及蛋白表达下调，ACSL4 mRNA及蛋白表达上调（P<0.05）；抑制剂组RVSP降低，RVHI、MT%、MA%减小，线粒体肿胀缓解，铁沉积减少，Nrf2、GPX4、SLC7A11 mRNA及蛋白表达上调，ACSL4 mRNA及蛋白表达下调（P<0.05）。结论 在高氧暴露下，miR-146b-5p过表达可促进新生大鼠肺血管重塑，其机制可能与抑制Nrf2/GPX4信号通路、调控铁死亡有关。

关键词

支气管肺发育不良相关肺动脉高压 / miR-146b-5p / 肺血管重塑 / 铁死亡 / 新生大鼠

基金资助

自治区重点研发计划项目（2024B03038-1）; “天山英才”医药卫生高层次人才培养计划（TSYC202401A041）