miR-155-5p调节TLR4/MAPK/NF-κB通路对川崎病小鼠炎症反应、冠状动脉病变及免疫功能的影响

摘要

目的 探究微小RNA（miRNA, miR）-155-5p调控TLR4/MAPK/NF-κB通路对川崎病小鼠炎症反应、冠状动脉病变及免疫功能的影响。方法 将60只雄性BALB/C小鼠采用随机数字表法分为健康组、川崎病（Kawasaki disease, KD）组、miR-155-5p agomir（激动剂）组、agomir-NC（激动剂阴性对照）组、miR-155-5p antagomir（拮抗剂）组、antagomir-NC（拮抗剂阴性对照）组，每组10只。采用干酪乳杆菌细胞壁提取物腹腔注射法建立KD小鼠模型。采用ELISA法检测白细胞介素（interleukins, IL）-6、IL-1β、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor, TNF）-α水平，流式细胞术检测淋巴细胞亚群CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T百分率及CD4⁺/CD8⁺比值，高频小动物超声成像法检测冠状动脉内径，苏木精-伊红染色观察冠状动脉组织病理形态，TUNEL染色观察冠状动脉组织内皮细胞凋亡情况，免疫印迹法检测核因子κB（nuclear factor kappa-B, NF-κB） p65、磷酸化NF-κB p65（phosphorylated NF-κB p65, p-NF-κB p65）、Toll样受体4（Toll-like receptor 4, TLR4）、p38丝裂原激活的蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase, MAPK）蛋白表达水平。结果 与健康组相比，KD组冠状动脉管壁增厚、内皮脱落，大量炎性细胞浸润，平滑肌层排列紊乱，伴血管扩张及管腔狭窄；miR-155-5p agomir组冠脉炎性浸润、管壁增厚及管腔狭窄较KD组显著加重；miR-155-5p antagomir组冠状动脉炎性浸润减少、管壁增厚减轻，平滑肌排列较规整，管腔狭窄明显改善。与健康组相比，KD组IL-6、IL-1β、TNF-α水平与CD4⁺百分率、CD4⁺/CD8⁺比值、冠状动脉内径、内皮细胞凋亡率及p-NF-κB p65、TLR4、p38 MAPK蛋白表达水平升高（P<0.05）,CD3⁺、CD8⁺百分率降低（P<0.05）。与KD组相比，miR-155-5p agomir组IL-6、IL-1β、TNF-α水平与CD4⁺百分率、CD4⁺/CD8⁺比值、冠状动脉内径、内皮细胞凋亡率及p-NF-κB p65、TLR4、p38 MAPK蛋白表达水平升高（P<0.05）,CD3⁺、CD8⁺百分率降低（P<0.05）;miR-155-5p antagomir组IL-6、IL-1β、TNF-α水平与CD4⁺百分率、CD4⁺/CD8⁺比值、冠状动脉内径、内皮细胞凋亡率及p-NF-κB p65、TLR4、p38 MAPK蛋白表达水平降低（P<0.05）,CD3⁺、CD8⁺百分率升高（P<0.05）。结论 川崎病模型小鼠中过表达miR-155-5p可加重炎症反应、冠状动脉病变及内皮细胞凋亡，诱发免疫功能紊乱，其机制可能与调控TLR4/MAPK/NF-κB通路相关；抑制miR-155-5p表达则可逆转上述病理改变。

关键词

川崎病 / 炎症反应 / miR-155-5p / 内皮细胞凋亡 / Toll样受体4 / 免疫功能 / 小鼠

基金资助

国家自然科学基金资助项目（82106792）