当归乙醇提取物抑制黑色素瘤B16-F10细胞增殖、诱导凋亡的作用及机制研究

摘要

目的：探究当归乙醇提取物（EEA）对黑色素瘤细胞B16-F10细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法：噻唑蓝（MTT）法评价细胞存活率；细胞克隆形成法检测细胞增殖能力；倒置显微镜观察细胞汇合度及形态变化；Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡；流式细胞术（FCM）检测细胞周期和凋亡；透射电镜（TEM）观察细胞线粒体形态结构变化；免疫印迹法（Western blot）检测细胞周期、凋亡、线粒体生物发生和动力学相关蛋白的表达情况。结果：与空白对照组相比，10～400μg/mL EEA处理24 h和48 h后，细胞存活率降低（P<0.05,P<0.01）;100μg/mL和200μg/mL EEA处理24 h后，细胞汇合度下降，出现皱缩变圆、体积缩小等形态改变及染色质固缩等凋亡特征；10～200μg/mL EEA处理14 d后，细胞克隆数目减少（P<0.01）;200μg/mL EEA处理24 h后，细胞内线粒体变圆变短，其内容物严重破坏甚至消失；20～200μg/mL EEA处理24 h后，G0/G1期细胞比例增加（P<0.01），早期细胞凋亡率增加（P<0.01），活化胱天蛋白酶-9(cleaved caspase-9)和Bax蛋白表达升高（P<0.01），细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、Cyclin E、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、CDK4、Bcl-2、Bad、Bcl-XL、沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α(PGC-1α)、核呼吸因子1(NRF1)、线粒体转录因子A(TFAM)、线粒体融合蛋白2(MFN2)、视神经萎缩蛋白1(OPA1)蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01），动力相关蛋白1(DRP1)和Fission 1蛋白（FIS1）表达升高（P<0.05,P<0.01）。结论：EEA对B16-F10细胞具有显著抑制作用，其机制可能与诱导细胞G1/S期阻滞，激活内源性线粒体途径细胞凋亡，破坏线粒体生物发生与动力学平衡有关。

关键词

当归乙醇提取物 / B16-F10细胞 / 细胞周期 / 凋亡 / 线粒体生物发生与动力学