LC-MS/MS法测定蛋白降解靶向嵌合体药物ARV-471在小鼠体内的浓度及其药动学

摘要

目的：以ARV-471作为蛋白降解靶向嵌合体（PROTAC）代表药物，建立高效液相色谱-三重四极杆质谱联用（HPLC-MS/MS）方法测定ARV-471在小鼠血浆中的浓度，用于研究小鼠体内的药动学特征。方法：以维拉帕米为内标，小鼠血浆样品经甲醇沉淀蛋白后，离心取上清液进行LC-MS/MS分析。采用ACQUITY UPLC HSS T3（1.8μm,2.1 mm×50 mm）色谱柱；以乙腈（含0.1%甲酸）和2 mmol/L甲酸铵水溶液（含0.1%甲酸）为流动相进行梯度洗脱；流速为0.6 m L/min；进样体积为2μL；采用电喷雾离子源（ESI）、正离子扫描、多反应检测（MRM）模式。考察该方法的专属性、标准曲线和定量限、精密度与准确度、回收率与基质效应、稳定性和稀释可靠性，并对小鼠静脉注射5 mg/kg和口服灌胃给药30 mg/kg的ARV-471后的血药浓度和药动学参数进行测定和计算。结果：ARV-471在2.0～2 000.0 ng/mL浓度范围内线性关系良好，批内和批间准确度在85.0%～115.0%之间，批内和批间精密度RSD小于15%，专属性、基质效应、稳定性等均符合指导原则要求。药动学参数显示：雄性和雌性小鼠灌胃给药30 mg/kg的ARV-471后，C_max分别为（2 947.19±454.77）和（2 682.02±342.23）ng/mL,AUC_0-t分别为（23 357.37±3 488.00）和（20 161.23±1 871.32）ng·h·m L^-1,T_1/2分别为（3.11±0.18）和（2.93±0.62）h,T_max分别为（1.83±0.41）和（2.00±0.00）h；雄性和雌性小鼠静脉注射5 mg/kg的ARV-471后，AUC_0-t分别为（18 219.07±2 059.41）和（17 238.01±2 380.55）ng·h·mL^-1,T_1/2分别为（2.76±0.23）和（2.73±0.20）h；雄雌小鼠的绝对生物利用度分别为（19.49±1.81）%和（21.37±3.19）%。结论：本研究建立了一种快速、灵敏的方法用于ARV-471的药动学研究，为PROTAC类药物的药动学研究奠定了基础。

关键词

蛋白降解靶向嵌合体 / 药动学 / 高效液相色谱-串联质谱法

基金资助

上海市2021年度“科技创新行动计划”生物医药科技支撑专项（21S11901900)