黄芪甲苷Ⅳ干预低糖介导的肿瘤免疫抑制微环境作用及其机制研究

摘要

目的：探讨黄芪甲苷Ⅳ（astragaloside Ⅳ，As-Ⅳ）干预低糖介导的肿瘤免疫抑制微环境作用及其分子机制研究。方法：采用MTT实验检测As-Ⅳ在体外低糖微环境下对CD4⁺T细胞增殖率；采用ELISA实验和qPCR实验检测白细胞介素-2（IL-2）、干扰素-γ（IFN-γ）、CD40L和转化生长因子-β1（TGF-β1）的水平；采用Western blot法检测CD4⁺T细胞葡萄糖转运蛋白（Glut-1）、糖酵解关键酶[糖激酶（HK）、磷酸果糖激酶1（PFK1）、丙酮酸激酶（PK）]、AKT/mTOR信号和AKT/GSK3β信号通路活性的表达；采用分子对接和加入AKT抑制剂实验进行验证；采用B16-PKM2-OE建立低糖肿瘤微环境动物模型进行验证。结果：MTT结果显示，As-Ⅳ能够促进低糖微环境下CD4⁺T细胞的增殖（P<0.05）;ELISA实验和qPCR实验检测结果显示，As-Ⅳ可以提高肿瘤组织中IL-2、IFN-γ、CD40L水平，降低TGF-β1的水平（P<0.05）;Western blot法检测结果显示，As-Ⅳ能够促进CD4⁺T细胞细胞膜表面Glut-1蛋白表达，同时呈浓度依赖性上调糖酵解关键酶表达，激活AKT/mTOR信号和AKT/GSK-3β信号；分子对接技术和加入AKT抑制剂实验结果提示As-Ⅳ激活AKT/mTOR信号和AKT/GSK-3β信号；动物实验结果显示As-Ⅳ通过激活低糖微环境下CD4⁺T细胞增殖与活化发挥抗肿瘤作用。结论：As-Ⅳ通过激活AKT/Glut信号促进低糖微环境下CD4⁺T细胞增殖与活化发挥抗肿瘤作用。

关键词

肿瘤浸润淋巴细胞 / 黄芪甲苷Ⅳ / 低糖肿瘤微环境 / 免疫抑制

基金资助

国家自然科学基金（81973658）; 蚌埠医学院重大科技项目孵化计划（2020byfy001）; 安徽省高等学校科学研究项目（2023AH051972）; 蚌埠医科大学自然科学类项目（2023byfy004）; 安徽高校自然科学研究项目（KJ2021A0788）