CA-4类衍生物LGD5诱导人宫颈癌HeLa细胞发生G2/M周期阻滞和凋亡的机制研究

摘要

目的：探究微管抑制剂CA-4类衍生物LGD5对人宫颈癌HeLa细胞的作用机制。方法：选用HeLa细胞，分为空白组、CA-4阳性对照组、不同浓度的LGD5组成实验组。采用MTT法考察LGD5对HeLa细胞的生长抑制情况并确定实验浓度，采用倒置显微镜和吖啶橙染色观察用药前后HeLa细胞形态学变化及细胞凋亡情况，采用DAPI免疫荧光染色考察LGD5对微管的作用，采用PI流式细胞术考察LGD5对细胞周期的影响，采用蛋白免疫印迹法考察LGD5对细胞周期蛋白和凋亡相关蛋白的影响。结果：MTT实验结果显示LGD5抑制HeLa细胞的生长抑制具有时间依赖性和剂量依赖性。定时拍照和吖啶橙染色观察到LGD5诱导HeLa细胞发生凋亡，并产生明显的染色质凝集和凋亡小体。DAPI染色观察到LGD5抑制HeLa细胞的微管聚合。PI流式细胞术结果显示LGD5诱导HeLa细胞发生G2/M周期阻滞，在12 h内具有时间依赖性和剂量依赖性，且差异有统计学意义（P<0.01）,24 h以后引起细胞凋亡且具有时间依赖性；Western blot结果显示，LGD5下调Cdc2和Cdc25C，上调p-Cdc2、Cyclin B1和p-histone H3，进一步验证LGD5诱导HeLa细胞发生G2/M周期阻滞，除此之外，LGD5使HeLa细胞Caspase 3表达增加，上调Caspase 9和Bax，下调Pro-caspase 9和Bcl-2，说明LGD5诱导HeLa细胞凋亡与线粒体途径有关。结论：CA-4类衍生物LGD5可抑制HeLa细胞的微管聚合，诱导其发生G2/M周期阻滞，进而通过线粒体途径诱导细胞发生凋亡。

关键词

CA-4 / 微管 / 肿瘤 / G2/M细胞周期阻滞 / 细胞凋亡 / 作用机制