血小板增强肝癌血管生成及华蟾素的干预作用研究

摘要

目的：探讨血小板（PLT）对肝癌血管生成的影响以及华蟾素的干预作用。方法：先筛选PLT与肝癌细胞的适宜共孵育比例，制备条件培养基，确定华蟾素（CBG）的半数抑制浓度；然后，设对照组[人脐静脉内皮细胞（EC）+常规培养基]、串扰组[EC+CM＿HP(HUH7与PLT串扰制备的条培)]、干预组（EC+CM＿HP+CBG），采用划痕实验、小管形成实验、出芽实验和ELISA实验分别评估EC的迁移力、成管力、出芽能力以及共培养上清中血管内皮生长因子（VEGF）水平；运用Western blot检测VEGFR2、p-VEGFR2的表达，并采用抑制剂进行了反向验证。建立肝癌裸鼠皮下移植瘤模型，设Model组、Model+CBG组和Model+Apa组，通过Masson染色观察移植瘤的胶原表达情况，免疫荧光检测血管内皮标志物CD31和CD34的表达水平。结果：PLT∶HUH7=200时HUH7活力最强，HUH7与PLT串扰明显促进EC的增殖力（P<0.01）。与对照组相比，串扰组的迁移、成管、生芽能力增强，干预组的低于串扰组（P<0.01）。串扰组上清中VEGF的表达水平高于对照组，而干预组的低于串扰组（P<0.01）。串扰组p-VEGFR2蛋白的表达量较对照组显著增多，而干预组的表达量较串扰组少（P<0.01）。Model组可见大片胶原纤维沉积，CBG干预显著降低移植瘤组织胶原纤维沉积。Model组的肝癌移植瘤组织存在CD31和CD34表达，CBG干预显著降低肝癌移植瘤组织CD31和CD34的表达（P<0.01）。结论：PLT能增强肝癌的血管生成，CBG可能经由VEGF/VEGFR2通路抑制其成管能力。

关键词

肝癌 / 血管生成 / 血小板 / 人脐静脉内皮细胞 / 华蟾素