大黄糖络丸通过AMPK/mTOR/ULK1通路调控糖尿病肾病小鼠足细胞自噬的作用机制研究

摘要

目的：探究大黄糖络丸（DHT）基于腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/unc-51样激酶1（AMPK/mTOR/ULK1）信号通路对糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）小鼠的干预作用。方法：40只造模成功的C57BL/KSJ-db/db（以下简称db/db）小鼠随机分为模型组，达格列净组(1.5 mg·kg^-1·d^-1),DHT高、中、低剂量组(3.6、1.8、0.9 g·kg^-1·d^-1)，每组8只；另取10只C57BL/KSJ-db/dm（以下简称db/m）小鼠为正常组，正常组和模型组给予生理盐水，治疗组小鼠分别给予相应药物，连续给药10周，1次/d。于给药0、4、8、10周固定时间，禁食不禁水12 h，取尾静脉血检测空腹血糖（FBG）；于给药0、5、10周末收集尿液检测尿中白蛋白、肌酐含量，计算尿白蛋白肌酐比值（ACR）；给药10周后，检测各组小鼠24 h尿总蛋白，血肌酐（Scr），尿素氮（BUN）含量；蛋白免疫印迹法检测肾脏组织p-AMPK、p-mTOR及p-ULK1蛋白的表达水平，以及自噬关键分子酵母Atg6同系物1（Beclin-1）、微管相关蛋白1轻链3（LC3）、P62蛋白的表达水平；免疫组化法检测肾脏组织足细胞裂孔膜蛋白（Nephrin、Podocin）的表达水平；采用光学显微镜和透射电镜观察肾脏组织病理形态学变化。结果：与模型组比较，达格列净组和DHT组小鼠FBG、ACR、24 h尿总蛋白均降低，Scr、BUN无统计学差异；肾组织中p-AMPK、p-ULK1表达水平升高，p-mTOR表达水平降低及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1表达水平升高，P62表达水平降低（P<0.01,P<0.05）；肾小球的足细胞裂孔膜蛋白Nephrin、Podocin表达水平升高（P<0.01,P<0.05）；肾脏病理损害减轻；透射电镜显示自噬小体、自噬溶酶体数量增加。结论：DHT可能通过调控AMPK/mTOR/ULK1信号通路，增强足细胞自噬，保护肾小球，延缓DN发展进程。

关键词

大黄糖络丸 / 糖尿病肾病 / 腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/unc-51样激酶1信号通路 / 自噬