镰形棘豆提取物调节PI3K/AKT/Nrf2通路改善高糖诱导足细胞氧化损伤的作用及机制研究

摘要

目的：通过PI3K/AKT/Nrf2通路探讨镰形棘豆提取物含药血清对高糖诱导的足细胞氧化应激损伤的作用。方法：体外培养大鼠肾足细胞，筛选D-葡萄糖造模浓度和时间以及镰形棘豆提取物含药血清最佳给药浓度和时间；将细胞分为正常组、高糖组、高糖+空白血清组、镰形棘豆组、抑制剂组、镰形棘豆+抑制剂组，采用罗丹明染色及电镜观察足细胞形态、病理学改变，流式细胞术检测细胞凋亡率，划痕实验检测细胞迁移能力，免疫荧光及荧光探针法分别检测细胞p-AKT荧光表达和ROS水平，ELISA检测细胞上清液中MDA、NO、SOD、T-AOC含量，Western blot检测细胞p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、Nrf2蛋白表达，RT-qPCR检测细胞Nrf2、HO-1、GCLM、SOD mRNA表达。结果：筛选出45 mmol/L D-葡萄糖诱导48 h为最佳造模条件，含药血清1倍稀释及48 h为最佳给药浓度和时间。与正常组比较，高糖组细胞足突广泛融合、相互粘连，凋亡率、迁移能力和ROS水平均升高（P<0.01）,p-AKT荧光表达降低（P<0.01）,MDA、NO含量增加，SOD、T-AOC含量显著降低（P<0.01）,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、Nrf2蛋白表达及Nrf2、HO-1、GCLM、SOD mRNA表达均降低（P<0.01）。与高糖组比较，各给药组细胞足突融合、相互粘连情况有不同程度的改善，凋亡率、迁移能力和ROS水平均降低（P<0.05,P<0.01）,p-AKT荧光表达增加（P<0.01）,MDA、NO含量下降，SOD、T-AOC含量升高（P<0.01）,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、Nrf2蛋白及Nrf2、HO-1、GCLM、SOD m RNA表达均升高（P<0.05,P<0.01），而抑制剂组细胞ROS水平升高（P<0.01）,pAKT荧光表达降低（P<0.05）,NO含量升高，T-AOC含量降低（P<0.01）,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、Nrf2蛋白及HO-1、GCLM、SOD m RNA表达降低（P<0.05,P<0.01）。与镰形棘豆组比较，镰形棘豆组+抑制剂组细胞凋亡率、迁移能力和ROS水平均升高（P<0.05,P<0.01）,p-AKT荧光表达降低（P<0.01）,MDA、NO含量增加，SOD、T-AOC含量降低（P<0.05,P<0.01）,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、Nrf2蛋白及HO-1、GCLM、SOD m RNA表达均降低（P<0.05,P<0.01）。结论：镰形棘豆提取物可能通过激活PI3K/AKT/Nrf2信号通路，从而改善高糖诱导的足细胞形态、结构和功能的改变，抑制氧化应激反应，达到保护足细胞的作用。

关键词

镰形棘豆提取物 / 糖尿病肾脏病 / 足细胞 / 氧化应激 / PI3K/AKT/Nrf2