司美格鲁肽通过调控AMPK/mTOR/ULK1通路介导的自噬减轻缺氧/复氧AC16人心肌细胞炎症损伤

摘要

目的：观察司美格鲁肽对缺氧/复氧条件下人AC16心肌细胞炎症和自噬的影响。方法：取对数生长期的AC16细胞，随机分为4组：对照组（CON）、缺氧/复氧组（H/R）、缺氧/复氧+司美格鲁肽组（H/R+SEM）、缺氧/复氧+司美格鲁肽+3-MA组（H/R+SEM+3-MA）。除对照组外，其余3组细胞均进行缺氧8 h、复氧12 h处理。CCK-8法检测细胞活性。ELISA试剂盒检测IL-1β及TNF-α。Western blot检测各组通路相关蛋白AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、ULK1、p-ULK1及各组细胞自噬相关蛋白Beclin-1和LC3的表达。激光共聚焦显微镜观察各组mRFP-GFP-LC3腺病毒感染AC16细胞荧光图，并对细胞内的自噬体定量分析。透射电子显微镜观察各组AC16细胞自噬体及自噬溶酶体结构。结果：与CON组比较，H/R组IL-1β与TNF-α的表达显著增加（P<0.01）；与H/R组比较，H/R+SEM组IL-1β与TNF-α的表达量明显降低（P<0.01）；与H/R+SEM组比较，H/R+SEM+3-MA组炎症因子的表达量显著增加（P<0.05）。Western blot结果显示：与CON组比较，H/R组心肌细胞p-AMPK/AMPK表达明显升高（P<0.05）,p-mTOR/mTOR表达明显降低（P<0.05）,pULK1/UKL1表达明显升高（P<0.01）；与H/R组比较，H/R+SEM组心肌细胞pAMPK/AMPK表达明显升高（P<0.05）,p-mTOR/mTOR表达明显降低（P<0.01）,pULK1/UKL1表达明显升高（P<0.01）；与H/R+SEM组比较，H/R+SEM+3-MA组心肌细胞p-AMPK/AMPK表达明显降低（P<0.01）,p-mTOR/mTOR表达明显升高（P<0.05）,pULK1/UKL1表达明显降低（P<0.05）。与CON组比较，H/R组心肌细胞Beclin1和LC3表达明显升高（P<0.05）；与H/R组比较，H/R+SEM组心肌细胞Beclin1和LC3表达明显升高（P<0.01）；与H/R+SEM组比较，H/R+SEM+3-MA组心肌细胞Beclin1和LC3表达明显降低（P<0.05,P<0.01）。激光共聚焦显微镜观察各组mRFP-GFP-LC3腺病毒转染人AC16细胞荧光图，并对细胞内的自噬体定量分析：与CON组比较，H/R组心肌细胞自噬体显著增多（3.67±2.31vs. 9.67±1.53,P<0.05）。与H/R组比较，H/R+SEM组心肌细胞自噬体明显增多（9.67±1.53 vs. 18.67±3.21,P<0.01）。与H/R+SEM组比较，H/R+SEM+3-MA组心肌细胞自噬体数量明显减少（18.67±3.21vs. 12.33±1.53,P<0.05）。结论：司美格鲁肽可能通过AMPK/mTOR/ULK1通路适度调节自噬，减少炎症因子释放，减轻缺氧/复氧导致的心肌炎症损伤。

关键词

司美格鲁肽 / 缺氧/复氧 / 心肌细胞 / 炎症 / 自噬