基于自噬流及CXCL12/CXCR4轴研究天麻钩藤饮对肝阳上亢证脑缺血再灌注大鼠模型的神经保护作用及机制

摘要

目的：探讨肝阳上亢证缺血性脑卒中的自噬状态及天麻钩藤饮的作用机制。方法：将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、天麻钩藤饮高、中、低剂量组(20.52、10.26、5.13 g生药·kg^-1·d^-1)及尼莫地平组(30 mg·kg^-1·d^-1)，附子汤(2 g生药·kg^-1·d^-1)灌胃和线栓法构建肝阳上亢证脑缺血再灌注大鼠模型，于附子汤灌胃21 d开始给药，连续12 d。观察肝阳上亢证候体征指标易激惹程度、24 h饮水量、24 h尿量、面温，ELISA法检测血浆去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）水平，Zea Longa法和mNSS法进行神经功能评分，HE染色观察脑组织病理变化，Western blot法检测LC3B、可溶性及不可溶性蛋白p62的表达以评价自噬流，PCR阵列技术分析细胞自噬差异表达基因功能，qRT-PCR和Western blot法检测趋化因子受体4（CXCR4）、趋化因子基质细胞衍生因子-1（CXCL12）的基因表达。结果：与假手术组相比，模型组易激惹程度、24 h饮水量、24 h尿量、面温及NE、E、cGMP水平升高（P<0.01），神经功能评分升高（P<0.01），皮层神经元受损严重，可溶性蛋白p62表达降低（P<0.01）,LC3BⅡ、不可溶性蛋白p62表达升高（P<0.01）,CXCR4、Lamp1、Tgfb1、APP、Rab24等多个与自噬与凋亡共调节、自噬囊泡及自噬溶酶体融合过程相关基因表达失衡，CXCR4、CXCL12的mRNA、蛋白表达升高（P<0.01）。与模型组相比，天麻钩藤饮各剂量组易激惹指数、24 h饮水量、24 h尿量、面温及NE、E、cGMP水平降低（P<0.05,P<0.01），神经功能评分降低（P<0.05,P<0.01），皮层神经元病理结构得以改善，可溶性、不可溶性p62蛋白表达降低（P<0.01）,LC3BⅡ表达升高（P<0.01），逆转CXCR4、Lamp1、Tgfb1、APP、Rab24等基因的mRNA表达，降低CXCR4、CXCL12的m RNA、蛋白水平（P<0.01）。结论：肝阳上亢证脑缺血再灌注病证结合模型多种功能的自噬基因被激活，但自噬流受阻，天麻钩藤饮可能通过改善自噬流和阻断CXCL12/CXCR4轴保护大鼠。

关键词

天麻钩藤饮 / 缺血性脑卒中 / 肝阳上亢证 / 自噬流 / PCR阵列 / CXCL12/CXCR4轴