基于肝脏药物代谢酶CYP450表达探讨鸦胆子苦醇对裸鼠的肝毒性研究

摘要

目的：基于肝脏药物代谢酶CYP450表达探讨具有广谱抗癌效应的鸦胆子苦醇对裸鼠的肝毒性研究。方法：取56只裸鼠随机分为空白组、鸦胆子苦醇低剂量组（2 mg/kg）、鸦胆子苦醇高剂量组（4 mg/kg）、顺铂组（2 mg/kg），每组14只，各组使用相应药物进行腹腔注射，空白组使用等量生理盐水注射，每3 d注射1次，持续6周。计算各组裸鼠死亡率情况，观察裸鼠常规生长状态，记录给药前后裸鼠体质量变化情况，取材后称量记录肝脏重量，并计算肝脏系数（肝脏重量/体质量×100%），观察记录肝脏颜色、形态；苏木素-伊红（HE）染色观察肝脏组织病理变化；ELISA检测裸鼠血清中的丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）、碱性磷酸酶（AKP）和白蛋白（ALB）水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和Western blot分别检测裸鼠肝脏药物代谢关键酶CYP450中的多个亚型酶CYP2E1、CYP3A11、CYP2C19、CYP1A2、CYP2D6和CYP2C9的mRNA及蛋白表达水平。结果：与空白组比较，鸦胆子苦醇低剂量组裸鼠死亡率为0，生长状态良好，饮食、行动、精神状态正常，体质量变化情况、肝脏系数比一致，肝脏颜色红润，镜下可见肝小叶形态完整，结构清晰，肝细胞排列规则，无炎症细胞浸润，ALT、AST、LDH、AKP、ALB含量无统计学差异，CYP2E1、CYP3A11、CYP2C19、CYP1A2、CYP2D6和CYP2C9的mRNA及蛋白表达无统计学差异（均为P>0.05）；鸦胆子苦醇高剂量组裸鼠死亡率为14.3%，生长状态略微欠佳，饮食、行动、精神状态减低，体质量增长缓慢，肝脏系数比增大，肝脏颜色为红褐色，部分肝小叶界限不清，少量肝细胞排列松散，ALT、AST、LDH、AKP、ALB含量显著增高，CYP2E1、CYP3A11、CYP1A2、CYP2D6和CYP2C9的mRNA水平显著降低，CYP2E1、CYP3A11、CYP1A2和CYP2D6的蛋白表达显著降低（均为P<0.05或P<0.01），但CYP2C19的mRNA及蛋白表达、CYP2C9的蛋白表达无统计学差异（P>0.05）；顺铂组裸鼠死亡率为35.7%，生长状态较差，饮食、行动、精神状态低下，体质量增长较少，肝脏系数比显著增高，肝脏颜色为暗红色，肝窦和中央静脉充血，肝细胞排列紊乱、胞核固缩，排列松散，ALT、AST、LDH、AKP、ALB含量显著增高，CYP2E1、CYP3A11、CYP2C19、CYP1A2、CYP2D6和CYP2C9的mRNA及蛋白表达显著降低（均为P<0.05或P<0.01）。结论：鸦胆子苦醇的剂量与对裸鼠的肝毒性具有相关性，高剂量的鸦胆子苦醇对裸鼠具有肝毒性，可能与降低血清中ALT、AST、LDH、AKP、ALB水平，抑制肝脏药物代谢关键酶CYP450中的多个亚型酶的表达进而降低毒性物质的代谢有关。

关键词

鸦胆子苦醇 / 肝毒性 / 药物代谢酶 / 裸鼠 / 顺铂