基于网络药理学、分子对接及实验验证探讨高良姜等三味山姜属中药治疗胃溃疡寒证的作用机制

摘要

目的：通过网络药理学与分子对接技术探究高良姜等三味山姜属中药治疗胃溃疡寒证的作用机制，并进行实验验证。方法：通过网络药理学常用技术手段，使用TCMSP、CNKI等数据库筛选三味山姜属中药中的活性成分及治疗胃溃疡疾病的相关靶点，并绘制Venn图、蛋白质网络互作图。对关键靶点进行通路富集分析，将所获得的“药物-活性成分-靶点-通路-疾病”等数据导入Cytoscape 3.10.2进行可视化处理，并选择Degree排名靠前的化合物通过AutoDock软件进行分子对接。72只SPF级SD大鼠分为9组，包括空白对照组、模型组、阳性对照组（干姜10.8 g/kg）、高良姜高、低（10.8和5.4 g/kg）剂量组，大高良姜高、低（9.0和4.5 g/kg）剂量组，红豆蔻高、低（10.8和5.4 g/kg）剂量组，采用冰乙酸和冰知母法复制胃溃疡寒证模型，按不同剂量水煎液灌胃，1 mL/100 g体质量，每天2次，连续4 d。通过计算大鼠溃疡指数及溃疡抑制率，HE染色法观察大鼠胃组织病理学变化，ELISA法检测胃组织中AKT1、MAP2K1、m TOR蛋白的表达，从而与网络药理学的相关结果相互印证。结果：将三味山姜属中药所有成分去重后共筛选出关键成分45个，与疾病交集靶点共124个，蛋白质网络互作图共包含124个节点，923条边，京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集共得到138条信号通路。分子对接分数均<-7.0 kcal/mol，即核心成分有效作用于核心靶点。实验验证结果显示：与模型组比较，三味山姜属中药不同剂量组对冰知母-冰乙酸法复制造成的胃溃疡寒证与胃黏膜水肿、充血等症状显著改善，溃疡面及出血点明显减少。与模型组比较，除红豆蔻低剂量组外，其他给药组AKT1蛋白表达水平均显著降低（P<0.05或P<0.01）；除大高良姜低剂量组外，其余给药组MAP2K1蛋白表达水平均显著降低（P<0.05或P<0.01）；除大高良姜和红豆蔻低剂量组外，各给药组mTOR蛋白表达水平均显著降低（P<0.05或P<0.01）。结论：三味山姜属中药可能通过多成分、多靶点、多通路的网络调控发挥抗炎、调控细胞增殖等作用来治疗胃溃疡。

关键词

高良姜 / 大高良姜 / 红豆蔻 / 胃溃疡寒证 / 网络药理学 / AKT1 / MAP2K1 / mTOR