基于CYP7A1/FXR/SHP途径探究大黄素对胆汁淤积性肝损伤小鼠的治疗作用

摘要

目的：探讨大黄素对胆汁淤积性肝损伤小鼠的治疗作用。方法：采用炔雌醇（ethinyl estradiol,EE）连续7 d皮下注射C57BL/6J小鼠建立胆汁淤积模型，检测小鼠体质量变化及血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、谷氨酰转肽酶（γ-GT）、总胆红素（TBIL）水平变化，HE（hematoxylin-eosin）染色和MASSON染色评价对肝脏等脏器的影响。通过动物模型给药确定药效后，石胆酸（lithocholic acid,LCA）诱导人正常肝细胞L02构建胆汁淤积细胞模型，采用CCK-8法，通过LCA干预24 h检测半数致死量(IC₅₀)确定造模浓度；通过大黄素干预24 h，检测各组的存活率确定大黄素给药浓度；再检测评价大黄素对LCA造模后肝细胞的存活率。并通过检测各组L02细胞肝损伤指标相关酶ALT、AST水平及氧化应激相关指标谷胱甘肽（GSH）、血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和活性氧（ROS）水平的变化，评价大黄素是否通过改善氧化应激发挥抗胆汁淤积的作用机制；Western blot分别检测小鼠肝脏中限速酶-胆固醇7-羟化酶（cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1）、核受体法尼醇X受体（farnesol X receptor,FXR）和小异二聚体伴侣（SHP）的蛋白表达情况。结果：大黄素显著改善小鼠体质量变化、肝指数，降低了血清中ALT、AST、γ-GT和TBIL的水平，改善了肝脏的病变趋势，抑制了肝脏损伤。提升了L02细胞存活率，改善了细胞的生存状态；降低了ALT和AST水平的变化，改善了细胞损伤。还通过提升GSH和SOD水平，降低MDA和ROS水平改善了氧化应激反应水平。此外，大黄素明显增加了小鼠肝脏中FXR、SHP并降低了CYP7A1的蛋白表达水平。结论：大黄素可以对胆汁淤积性肝损伤小鼠起到保护作用，其机制可能是通过抑制氧化应激损伤并通过FXR/CYP7A1/SHP途径调节胆汁酸合成代谢起到保护作用。

关键词

大黄素 / 胆汁淤积 / 肝损伤 / 氧化应激