基于体内实验和网络药理学探究清肝二十七味丸对非酒精性脂肪性肝炎的作用及作用机制

摘要

目的：基于体内实验和网络药理学探究清肝二十七味丸（QGW）对非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的作用及作用机制。方法：利用高脂饲料（HFD）诱导NASH小鼠模型，分为正常组（CON）、模型组（HFD）、清肝二十七味丸给药组（HFD+QGW, HQG）每组8只。第7周开始，HQG组给予药物连续作用至14周，并监测各组小鼠体质量相关指数，14周结束，解剖小鼠观察肝脏外观和形态，利用H&E染色、Oil red O染色方法观察小鼠肝组织的病理形态；比色法检测血清中的甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）含量；利用网络药理学通过数据库筛选QGW活性成分治疗NASH的关键靶点，并对关键靶点进行基因及通路富集分析；通过酶联免疫吸附试验（ELISA）定量分析白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6水平，Western blot及免疫组织化学实验对MAPK信号通路进行验证。结果：动物实验结果表明，经QGW干预模型小鼠8周后，可显著降低小鼠血清TG、TC、ALT、AST水平（P<0.01）;H&E染色、油红O染色观察到QGW显著改善HFD诱导肝脏组织中细胞排列紊乱、脂质蓄积和炎症浸润；网络药理学结果表明，共筛选得到18个核心成分，包括stylopine、7beta-senecioyloxyoplopa-3(14)Z, 8(10)-dien-2-one、（1R, 3R, 4R, 5S, 6S）-1-acetoxy-8-angeloxoyloxy-3,4-epoxy-5-hydroxybisabola-7(14),10-dien-2-one、 7beta-(3-ethyl-cis-crotonoyloxy)-14-hydroxy-notonipetranone、木犀草素等；25个核心靶点包括MAKP8、MAPK14、MAPK9、IL-6等，涉及包括MAPK信号通路在内的20条通路；ELISA实验表明，QGW显著降低小鼠血清中IL-1β、IL-6水平（P<0.01）,Western blot及免疫组织化学实验结果表明，与CON组相比，HFD组p-ERK/ERK、 p-JNK/JNK、 p-P38/P38蛋白水平显著升高（P<0.01），与HFD组相比，HQG组p-ERK/ERK、pJNK/JNK、p-P38/P38蛋白水平显著降低（P<0.05,P<0.01）。结论：QGW改善HFD诱导的NASH小鼠肝脏脂质蓄积及炎症浸润，其作用机制可能与抑制MAPK信号通路相关。

关键词

清肝二十七味丸 / 非酒精性脂肪肝炎 / 网络药理学 / MAPK信号通路