益气活络方调节PI3K/Akt/mTOR通路抑制胶原诱导型关节炎大鼠滑膜炎症的作用机制

摘要

目的：研究益气活络方对胶原诱导型关节炎（collagen-induced arthritis,CIA）大鼠的治疗作用及其对PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响。方法：将60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、甲氨蝶呤组（1 mg/mL）、益气活络方低、中、高剂量组（9.45、18.9、37.8 g/kg），每组各10只。除空白组外，其余大鼠均建立CIA大鼠模型。加强免疫后连续干预28 d后取材。期间观察大鼠一般情况、踝关节肿胀度以及关节炎指数评分，检测血清炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10水平；采用苏木精-伊红（HE）染色观察病理变化；实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测膝关节滑膜组织中PI3K、Akt、mTOR、CD86、CD206 mRNA表达；蛋白免疫印记法（Western blot）检测p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白水平；免疫组化测定CD86、CD206蛋白表达。结果：与空白组相比，模型组大鼠关节肿胀度及关节炎指数评分升高（P<0.01），踝关节病理切片可见大量炎性细胞浸润，纤维组织及滑膜细胞增生，排列紊乱，滑膜组织周边可见少量毛细血管增生，血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高，IL-10水平降低（P<0.05,P<0.01），膝关节滑膜组织中PI3K、Akt、mTOR、CD86 mRNA表达水平增加，而CD206 mRNA的表达降低（P<0.05,P<0.01），滑膜组织中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白的表达水平升高（P<0.05, P<0.01），踝关节滑膜中CD86蛋白表达升高，CD206蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）。与模型组相比，甲氨蝶呤组、益气活络方中、高剂量组大鼠踝关节肿胀程度减轻（P<0.05,P<0.01），关节炎指数评分降低（P<0.05,P<0.01），血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低，IL-10水平升高（P<0.05,P<0.01），膝关节滑膜组织中PI3K、Akt、mTOR、CD86、mRNA表达水平降低，而CD206 mRNA的表达升高（P<0.05,P<0.01），滑膜组织中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白的表达水平降低（P<0.05），踝关节滑膜中CD86蛋白表达降低，CD206蛋白表达升高（P<0.05），并能改善滑膜炎症。结论：益气活络方通过下调PI3K/Akt/mTOR通路，调控巨噬细胞极化，减少促炎因子，促进抑炎因子表达，从而缓解类风湿关节炎滑膜炎症，减轻关节病理损伤。

关键词

磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶点通路 / 类风湿关节炎 / 滑膜炎 / 益气活络方