miR-302b-3p调控GALNT3及FGF23/PI3K/AKT通路在主动脉瓣膜钙化的作用机制分析

摘要

目的 探讨miR-302b-3p调控GALNT3及FGF23/PI3K/AKT通路在主动脉瓣膜钙化的作用机制。方法 进行人心脏瓣膜间质细胞培养与钙化诱导，设置对照组(Control)、钙化模型组(Model)、模型组+miR-302b-3p mimics NC组(miR-302b-3p mimics NC)、模型组+miR-302b-3p mimics组(miR-302b-3p mimics)、模型组+miR-302b-3p inhibitor NC组(miR-302b-3p inhibitor NC)、模型组+miR-302b-3p inhibitor组(miR-302b-3p inhibitor),共6组。通过细胞转染、茜素红染色、碱性磷酸酶(ALP)染色、MTT检测细胞活性、实时荧光定量PCR、Western blot及双荧光素酶报告基因检测实验，检测相关分子的表达水平与活性变化。结果 与Control组比较，Model组中miR-302b-3p、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达水平升高(P均<0.05),细胞增殖活性以及导致ALP和钙结节的能力升高，N-乙酰氨基半乳糖转移酶3(GALNT3)和成纤维细胞生长因子23(FGF23)蛋白的表达水平降低(P均<0.05)。与Model组比较，miR-302b-3p mimics组miR-302b-3p和FGF23蛋白的表达水平升高(P均<0.05),OPN、OCN、RUNX2、GALNT3、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达水平降低(P均<0.05),细胞增殖活性以及导致ALP和钙结节的能力降低。miR-302b-3p inhibitor组则呈现相反的变化。双荧光素酶报告基因检测实验结果显示，与miR-302b-3p mimics+wt组相比，miR-302b-3p mimics NC+wt组相对荧光素酶活性升高(P<0.05),miR-302b-3p mimics+mut组与miR-302b-3p mimics NC+mut组相比，相对荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-302b-3p可抑制细胞钙化及增殖，通过负向调控GALNT3的表达水平，调控FGF23/PI3K/AKT通路来影响主动脉瓣膜的钙化过程。

关键词

miR-302b-3p / GALNT3 / FGF23/PI3K/AKT / 主动脉瓣膜 / 钙化