长链非编码RNA TRHDE-AS1调控SPRED1介导MAPK/ERK信号通路影响黑色素瘤转移的机制

摘要

目的 探讨TRHDE-AS1对A375细胞侵袭转移的调控作用及内在机制。方法 采用CCK-8、流式细胞术检测细胞活性，Transwell检测细胞侵袭能力，划痕实验检测细胞的愈合能力，实时荧光定量PCR检测促甲状腺激素释放激素降解酶反义RNA1(Thyrotropin releasing hormone degrading enzyme antisense RNA1,TRHDE-AS1)和含侧支发芽因子相关EVH域蛋白1(Sprouty related EVH1 domain containing 1,SPRED1)的mRNA表达，Western blot检测SPRED1、磷酸化的有丝分裂活化蛋白激酶(phosphoric mitogen-activated protein kinase 1,p-ERK)、RAS原癌基因(RAS proto-oncogene, RAS)、磷酸化的Raf蛋白激酶(phosphoric Raf protein kinase, p-RAF)、Raf蛋白激酶(Raf protein kinase, RAF)的蛋白表达，RNA pulldown检测TRHDE-AS1和SPRED1的结合。结果 细胞增殖活性结果显示，与Control组(100.00±0.00)%比较，TRHDE-AS1组细胞增殖活性(71.75±10.60)%显著降低(P<0.05),而TRHDE-AS1 siRNA组的细胞增殖活性(125.46±11.20)%显著升高(P<0.05)。流式细胞凋亡结果显示，与Control组(6.08±0.47)%比较，TRHDE-AS1组细胞凋亡率(22.39±0.47)%显著升高(P<0.05);而TRHDE-AS1 siRNA组的细胞凋亡率(3.47±1.07)%显著降低(P<0.05)。细胞划痕实验结果显示，与Control组(41.53±3.00)%比较，TRHDE-AS1组的细胞愈合能力(22.74±0.96)%显著降低(P<0.05);而TRHDE-AS1 siRNA组的细胞愈合能力(68.76±2.41)%显著升高(P<0.05)。Transwell实验结果显示，与Control组(135.20±9.01)比较，TRHDE-AS1组的细胞侵袭数量(66.00±4.85)显著降低(P<0.05);而TRHDE-AS1 siRNA组的细胞侵袭数量(204.80±9.83)显著升高(P<0.05)。Western blot结果显示，TRHDE-AS1组的p-ERK、Ras、p-Raf的蛋白表达水平较Control组显著降低(P<0.05);而TRHDE-AS1 siRNA组p-ERK、Ras、p-Raf的蛋白表达水平较Control组显著升高(P<0.05)。此外，TRHDE-AS1可以交互结合SPRED1,TRHDE-AS1组SPRED1的mRNA和蛋白表达水平较Control组显著升高(P<0.05);TRHDE-AS1 siRNA组SPRED1的表达水平显著降低(P<0.05)。结论 长链非编码RNA TRHDE-AS1可以通过促进交互蛋白SPRED1的转录和翻译水平，降低MAPK/ERK通路活性，抑制黑色素瘤的增殖、侵袭转移。

关键词

黑色素瘤 / 长链非编码RNA / 侵袭 / 机制