LncRNA NEAT1/miR-101-3p/RAC1在宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及机制研究

摘要

目的 探讨lncRNA NEAT1在宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用机制。方法 采用RT-qPCR法检测宫颈腺癌细胞系HeLa、宫颈鳞癌细胞系SiHa和人子宫内膜上皮细胞系EM中lncRNA NEAT1的表达；干扰或过表达lncRNA NEAT1后，通过CCK-8和Transwell观察宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化，扫描电镜观察细胞侵袭性伪足的变化；采用双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA NEAT1与miR-101-3p的靶向关系；通过免疫荧光、Transwell、CCK-8等方法检测lncRNA NEAT1/miR-101-3p/RAC1对SiHa和HeLa细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果 相比于EM细胞(0.99±0.04),宫颈癌SiHa(7.59±0.10,P<0.01)和HeLa(1.50±0.07,P<0.05)细胞中lncRNA NEAT1的表达明显升高。相比于sh-NC组，sh-NEAT1组(加入NEAT1敲低质粒)细胞增殖、迁移、侵袭及侵袭性伪足数量明显减少(P<0.05);相比于OE-NC组，OE-NEAT1组(加入NEAT1过表达质粒)SiHa、HeLa细胞增殖、迁移、侵袭及侵袭性伪足数量显著增加(P<0.05)。miR-101-3p与突变的NEAT1共转染后，相比于对照组(3.10±0.16)荧光素酶活性无显著变化(2.99±0.11,P>0.05),而与野生型NEAT1共转染后，相比于对照组(2.97±0.13)荧光素酶活性显著降低(1.15±0.05,P<0.01),提示lncRNA NEAT1与miR-101-3p靶向结合。RT-qPCR结果显示，与sh-NC组(SiHa, 0.97±0.09;HeLa, 1.07±0.06)相比，sh-NEAT1组miR-101-3p mRNA表达明显升高(SiHa, 3.86±0.39;HeLa, 2.62±0.51,P<0.01);与OE-NC组(SiHa, 0.98±0.20;HeLa, 1.05±0.18)相比，OE-NEAT1组miR-101-3p mRNA表达显著降低(SiHa, 0.35±0.05;HeLa, 0.14±0.03,P<0.05),提示lncRNA NEAT1与miR-101-3p的表达呈负相关。CCK-8、Transwell结果显示，siRNA-RAC1、miR-101-3p mimic使SiHa和HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭受到抑制(P<0.05),上调lncRNA NEAT1可部分逆转以上现象，使细胞增殖、迁移和侵袭数目增加(P<0.05)。结论 宫颈癌细胞中lncRNA NEAT1的表达显著升高，它作为miR-101-3p的竞争性内源RNA(ceRNA),通过竞争性结合miR-101-3p并部分控制其对RAC1的调控，进而调节宫颈癌细胞侵袭性伪足的形成并诱导细胞增殖、迁移和侵袭。

关键词

NEAT1 / miR-101-3p / RAC1 / 宫颈癌 / 侵袭