兔脂肪干细胞MR示踪前的超顺磁性氧化铁最佳标记条件筛选

摘要

目的 采用多聚赖氨酸修饰的超顺磁性氧化铁(Polylysine coated superparamagnetic iron oxide, PLL-SPIO)纳米颗粒标记兔脂肪间充质干细胞(Adipose derived stem cell, ADSCs),探讨不同SPIO浓度及孵育时间对ADSCs标记率、存活率及细胞增殖率的影响，筛选SPIO标记ADSCs的最优标记条件。方法 用含不同浓度的SPIO(12、25、50μg/mL)培养基培养第3代兔ADSCs,分别孵育不同时间(6、12、24、48 h),孵育完成后，普鲁士蓝染色计算细胞标记率；细胞毒性实验检测细胞存活率；根据细胞毒性实验结果筛选细胞存活率较大的6组细胞进行细胞增殖能力检测，检测细胞增殖率。结果 普鲁士蓝染色结果显示，各组细胞标记率及细胞内蓝染颗粒数量，随着SPIO浓度增大及孵育时间的延长而增多。细胞毒性实验结果显示，在较低SPIO浓度和较短孵育时间下，细胞存活率不受影响，且各组之间细胞存活率无明显差异，随着SPIO浓度增大及孵育时间延长，细胞存活率呈下降趋势，48 h时细胞存活率下降最明显。细胞增殖实验结果显示，实验组各组细胞增殖率，随SPIO浓度增大及孵育时间延长而降低；且细胞进入快速增长期后，实验组细胞增殖率与阴性对照组相比，均存在明显差异，其中12μg/mL SPIO-6 h组和25μg/mL SPIO-6 h组细胞增殖率与阴性对照组差异较其他各组小。结论 从细胞内SPIO颗粒含量及细胞标记率、存活率及增殖率几方面综合评价，25μg/mL SPIO孵育6 h,是本研究所选出的PLL-SPIO标记ADSCs的最优标记条件。

关键词

超顺磁性氧化铁 / 脂肪间充质干细胞 / 孵育浓度 / 孵育时间