LAG3对多房棘球蚴感染小鼠模型CD8⁺ T细胞免疫功能调节作用的研究

摘要

目的 研究淋巴细胞激活基因3（Lymphocyte activation gene 3, LAG3）对多房棘球蚴慢性感染小鼠CD8⁺T细胞免疫功能的调节作用。方法 取C57BL/6野生型（Wild-type, WT）和LAG3缺陷型（Knock-out, KO）小鼠各10只，每只小鼠经肝门静脉接种3 000个多房棘球蚴原头节建立多房棘球蚴感染模型。感染12周后，分别取两组小鼠肝脏和脾脏组织，采用苏木精-伊红（Hematoxylin-eosin, HE）染色观察肝脏病灶周围炎性细胞浸润和病理表现，通过免疫组织化学观察肝脏病灶周围“炎症微环境”与脾脏中CD8⁺ T的比例。收集两组小鼠肝脏与脾脏淋巴细胞，采用流式细胞术筛选不同CD8⁺ T细胞亚群，检测CD8⁺ T细胞、效应记忆CD8⁺ T细胞（Effector memory CD8⁺ T cell, CD8⁺ Tem）、中心记忆CD8⁺ T细胞（Central memory CD8⁺ T cell, CD8⁺ Tcm）、初始CD8⁺ T细胞（Naive CD8⁺ T cell, CD8⁺ Tn）比例与绝对数，以及分泌细胞因子γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素10（IL-10）和白细胞介素17A（IL-17A）的比例。通过多房棘球蚴虫体蛋白体外刺激两组小鼠肝脏淋巴细胞，采用流式细胞术检测CD8⁺ T细胞分泌细胞因子IFN-γ、IL-10和IL-17A的比例。结果 HE染色结果显示，与野生型小鼠比较，LAG3缺陷型小鼠肝脏形成的炎性病灶数量增多，差异有统计学意义（P<0.05）。免疫组织化学结果显示，与野生型小鼠比较，LAG3缺陷型小鼠肝脏病灶周围CD8⁺ T细胞募集升高，差异有统计学意义（P<0.05）;LAG3缺陷型小鼠脾脏CD8⁺ T细胞募集有降低的趋势，差异无统计学意义（P>0.05）。流式细胞术结果显示，与野生型小鼠比较，LAG3缺陷型小鼠肝脏效应记忆型CD8⁺ T细胞比例有升高的趋势，差异无统计学意义（P>0.05）;脾脏CD8⁺ T细胞比例降低，脾脏CD8⁺ Tem表型比例升高，差异均有统计学意义（P<0.01）。LAG3缺陷型小鼠肝脏和脾脏CD8⁺ T细胞分泌TNF-α和IL-10能力均增强,差异均有统计学意义（P<0.05）。多房棘球蚴的虫体蛋白体外刺激肝脏淋巴细胞实验结果显示，与野生型小鼠比较，LAG3缺陷型小鼠CD8⁺ T细胞分泌IFN-γ、IL-10比例升高，差异均有统计学意义（P<0.05）;LAG3缺陷型小鼠CD8⁺T细胞分泌IL-17A的能力有升高趋势（P>0.05）。结论 在小鼠多房棘球蚴慢性感染中，LAG3可抑制肝脏和脾脏CD8⁺T细胞免疫应答能力，调节炎症反应。

关键词

多房棘球蚴 / 多房棘球蚴病 / 淋巴细胞激活基因3 / CD8⁺ T细胞