骆驼刺提取物对脂多糖诱导的IEC-6细胞损伤模型NLRP3炎症小体及相关细胞因子的影响

摘要

目的 研究骆驼刺提取物(Alhagi pseudalhagi(M.B.)Desv. Extract, APE)对脂多糖诱导的大鼠小肠隐窝上皮细胞(Intestinal epithelial cell, IEC-6)损伤模型NLRP3炎症小体及相关细胞因子的影响。方法 培养IEC-6细胞，将其分为空白组、模型组、APE低、中、高浓度组，用1.0μg/mL的脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)诱导建立细胞炎症损伤模型，APE(低、中、高浓度：15、25、35μg/mL)干预后采用CCK-8法检测细胞的存活率，通过ELISA试剂盒检测炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α的分泌水平。蛋白质印迹法(WB)检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体信号通路5个关键蛋白：NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Cystein-asparate protease-1,Caspase-l)、凋亡相关斑点样蛋白(Apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)及抗凋亡蛋白Bcl-2(Anti-apoptosis Protein Bcl-2)和Bcl-xl(Anti-apoptosis Protein Bcl-xl)表达。结果 与空白组比较，模型组IEC-6细胞的存活率降低，NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白表达水平升高，抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl的表达水平降低，促炎因子IL-1β、IL-18和TNF-α的分泌水平升高，差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较，APE低、中、高浓度组细胞存活率升高，35μg/mL APE组IEC-6细胞的NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白相对表达水平降低，抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl的表达水平升高，差异有统计学意义(P<0.05)。中、高浓度的APE能够抑制炎症因子分泌，25μg/mL APE对IL-1β、IL-18、TNF-α炎症因子分泌水平抑制率分别为31.60%、31.19%和31.09%(P<0.05)。结论 骆驼刺提取物通过提高抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl的表达水平，下调NLRP3炎症小体组成成分以及促炎因子IL-1β、IL-18和TNF-α分泌，从而抑制NLRP3炎症小体组装和激活，实现缓解LPS对IEC-6细胞的损伤。

关键词

骆驼刺提取物 / 脂多糖 / 小肠隐窝上皮细胞 / NLRP3炎症小体

基金资助

新疆维吾尔自治区公益性科研院所基本科研项目(Ky2022zmy005)