高糖环境下药桑提取物脱氧野尻霉素对MC3T3-E1细胞的影响

摘要

目的 研究药桑提取物脱氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin, DNJ)在高糖环境下对MC3T3-E1细胞的增殖和成骨分化的作用。方法 取P4代MC3T3-E1细胞，在50 mmol/L的高糖环境下通过细胞毒性检测试剂盒(Cell dountingkit-8,CCK-8)检测不同浓度的DNJ(10 mmol/L、1 mmol/L、100μmol/L、10μmol/L、1μmol/L、100 nmol/L、10 nmol/L、1 nmol/L)干预对MC3T3-E1细胞增殖的影响，筛选出后续实验研究的DNJ浓度。取培养至对数生长期的MC3T3-E1细胞，按不同干预方式分为：空白组(完全培养基)、高糖组(50 mmol/L糖浓度的完全培养基)、实验组[50 mmol/L糖浓度的完全培养基+不同浓度DNJ(100、10、1μmol/L)溶液]。使用流式细胞技术检测细胞的凋亡和活性氧，采用ELISA试剂盒检测细胞上清液中AGEs和IL-1β、IL-6、TNF-α的含量，通过碱性磷酸酶染色及活性检测MC3T3-E1细胞的早期成骨能力的影响，通过茜素红染色和定量检测MC3T3-E1细胞的晚期成骨能力，采用RT-PCR检测IL-1β、IL-6、TNF-α、Bax、Bcl-2、IGF-1、ALP、OCN、OSX、Col-1和Runx2的mRNA表达情况。结果 高糖环境下，100、10、1μmol/L的DNJ可以促进MC3T3-E1细胞增殖。与高糖组相比，实验组凋亡率、活性氧含量、细胞上清液中AGEs、IL-1β、IL-6和TNF-α含量降低，差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果表明，与高糖组相比，实验组Bax、IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达降低，Bcl-2、IGF-1、ALP、OCN、OSX、Col-1和Runx2的mRNA表达升高，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 在高糖环境下，一定浓度范围内DNJ能够抑制MC3T3-E1细胞的凋亡和炎症因子的产生，促进成骨细胞的分化。

关键词

脱氧野尻霉素 / 高糖 / MC3T3-E1细胞 / 成骨分化