寒喘祖帕单煎配方与配伍合煎对16HBE细胞抗炎活性及非靶向代谢组学差异的研究

摘要

目的 考察寒喘祖帕按照传统配伍合煎及单煎配方的抗炎活性，并采用UPLC-Q-TOF/MS研究非靶向代谢组学差异。方法 通过体外脂多糖诱导16HBE炎症细胞，使用CCK-8法筛选出单煎配方组和配伍合煎组的剂量；采用逆转录酶聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction, RT-PCR)技术测定细胞中炎症因子IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表达水平，并采用UPLC-TOF/MS技术对细胞进行非靶向代谢组学分析：分为正常组(16HBE细胞+培养基)、模型组(16HBE细胞+培养基+0.1μg/mL LPS)、寒喘祖帕单煎配方组(16HBE细胞+培养基+0.1μg/mL LPS+50μg/mL单煎配方)、寒喘祖帕配伍合煎组(16HBE细胞+培养基+0.1μg/mL LPS+50μg/mL配伍合煎)。以此探究寒喘祖帕颗粒发挥抗炎活性的相关代谢通路，寻找寒喘祖帕颗粒抗炎活性相关的差异代谢物。结果 与正常组比较，模型组在给药浓度为0.1μg/mL时细胞生长存活率未受到限制，差异无统计学意义(P>0.05);配伍合煎组在给药浓度为0～400μg/mL范围内时，细胞存活率未受影响，浓度>800μg/mL时，细胞生长存活率下降，差异具有统计学意义(P<0.01);而单煎配方组在浓度<50μg/mL时，细胞生长存活率未受到限制，浓度≥100μg/mL时，细胞生长存活率下降，差异具有统计学意义(P<0.01);RT-PCR实验结果显示：与正常组比较，模型组的IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的表达上升，差异具有统计学意义(P<0.001),50μg/mL单煎配方较100μg/mL,IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的表达下降，差异具有统计学意义(P<0.001);在相同药物浓度干预下，与正常组比较，模型组的IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的表达上升，差异具有统计学意义(P<0.001),与模型组比较，单煎配方组和配伍合煎组可同时降低IL-6、IL-8和TNF-α mRNA的表达，差异具有统计学意义(P<0.001);配伍合煎组与单煎配方组比较，配伍合煎组IL-6、IL-8 mRNA的表达较单煎配方低，差异具有统计学意义(P<0.05)。代谢组学分析结果筛选出模型组与配伍合煎组间的内源性差异代谢物68个，主要与色氨酸代谢、甘油磷脂代谢和嘧啶代谢等有关；模型组与单煎配方组间识别出内源性差异代谢物62个，主要与甘油磷脂代谢、精氨酸和脯氨酸代谢等有关。结论 寒喘祖帕单煎配方与配伍合煎对LPS诱导的炎症细胞模型抗炎效果存在差异，非靶向代谢组学分析结果表明两种方式通过不同的代谢通路发挥抗炎活性。

关键词

寒喘颗粒 / 单煎配方 / 配伍合煎 / 炎症 / 非靶向代谢组学